北京大学基础医学院微生物学教研窒    李俊茜   庄辉

    近年来发现一些TTV相关病毒，如TTV样微小病毒(TLMV)、PM病毒（PMV）、SANBAN病毒(SANBAN)、YONBAN病毒（YONBAN）和SEN病毒(SENV)等，并对其致病性进行了一些研究。
    一、SANBAN病毒
    SANBAN（日文意“第三”）病毒是从日本一名健康供血员血清中分离的，该供血员用原型TTV PCR检测为TTV DNA阴性，但用测定TTV DNA覆盖面更广的PCR 检测为阳性。Hijikata[1]等对该株病毒的全序列分析表明，其基因组全长为3808个核苷酸，较TTV原型株TA278（3 852bp）短44个核苷酸，但其基因组结构与TTV TA278相似。其与TTV的氨基酸序列同源性很低。在ORF1 SANBAN较TTV TA278短25个氨基酸，同源性仅为34.2%。TTV ORF1含有2个Rep蛋白功能区，分别为FTL和YXXK，但SANBAN无此功能区，分别退化为FSL和YKFY。另一区别是TTVORF1在4个位点含天门冬氨酰胺糖基化功能区（N[^P][TS][^P]成群排列，但SANBAN仅在较远的下游 有2个此类功能区。根据66株TTV和SANBAN N22区185核苷酸序列建立的基因发生树分析表明，多数TTV属于G1~G6组，但SANBAN和少数分离株与现已报告的极大多数TTV距离很远，因此，根据ORF1序列分析，SANBAN不少是与TTV距离很远的一个基因型，或者可能是一种新病毒[2]。
    二、TTV样微小病毒（TLMV）
    2000年Takahashi等[3]报告，应用TTV DNA引物作PCR，检测日本300份因抗-HCV阳性而未被使用的供血员血浆，结果10份TTV DNA滴度>105拷贝/ml，其中3份编号为CBD231、279和203的血浆PCR产物长度较预期为短（约1.2kb），称为扩增产物0，然后对此扩增产物进行测序，并设计新引物作反向PCR，获得一个长约2.1kb DNA，称为扩增产物1，再根据其序列设计引物作反向PCR，获得1.2kb DNA,称为扩增产物2，经测序证明其与扩增产物0的序列相同。由扩增产物1和2序列推算，该病毒的全长DNA序列较TTV为短，分别为2860nt（CBD231株）、2856nt（CBD279株 ）和2897nt（CBD203株），但较鸡贫血病毒（CAV）长，证明是一种新病毒，命名为TTV样微小病毒（TLMV）。CBD231株与CBD279株的核苷酸同源性为91%，CBD203株与CBD231株的同源性为58%。CBD203株与CBD231株和CBD279株的距离相当于SANBAN与TTV TA278的距离。
    TLMV可用PCR扩增，不需逆转录；用毛豆核酸酶消化后不能再扩增，提示为单股DNA。单股DNA特异性杂交试验表明，TLMV与TTV和CAV（鸡贫血病毒相似，其基因组为负链DNA。其基因结构也与TTV和CAV相似，三者均有3个开放读框（ORF）（有一个较长的ORF1和ORF2，在ORF1前端均与ORF2部分重叠）。虽然TLMV与TTV和CAV式因组全长不等，但均有一个含T-Ag功能区和GGGCAA得复序列的相对保守区。根据保守区的基因序列作基因发生树分析表明，TLMV更接近于TTV，但与CAV距离较远。
    TLMV的ORF1编码660个氨基酸，因该蛋白具有若干N化功能区，推测为糖蛋白，这与TTV和CAV相似。3株TLMV的ORF1氨基酸序列呈高度异源性，CBD231与CBD279氨基酸序列同源性为90%，CBD231与CBD203及CBD279与CBD203的同源性均为35%。但所有3株TLMV ORF1蛋白的氨基端均富含精氨酸（R）、色氨酸（W）和苯丙氨酸（F）残基。ORF1蛋白的氨基端富含精氨酸是TTV、TLMV和CAV的共同特点。但TTV和TLMV的ORF1蛋白富含色氨酸，而CAV不富含色氨酸。相反，TLMV和CAV的ORF1蛋白富含丙氨酸，而TTV则不富含丙氨酸。TLMV ORF2编码约91个氨基酸，从ORF1上游的重叠区开始，TTV和CAV也具有此特点。3株TLMV的ORF2氨基酸序列同源性是：CBD231与CBD279为88%，CBD231与CBD203为33%，CBD279与CBD203为34%。
    回顾性分析一名输血后患者的系列血清及其6名供血员的血标本表明,TLMV可经输血传播，潜伏期为6~8周，但被感染者未出现肝炎及其他症状。
    三、PM病毒(PMV)
    2000年Hallett[4]等用原型TTV PCR法检测一名患非甲~戊型肝炎和凝血障英国4岁女童（PM）血清和肝组织标本，发现222bp DNA，其与基因库中所有TTV相应序列的差异很大。后对该患者的PCR产物进行克隆，共获10个克隆，其中8个含有该序列，另2个克隆各有1个点突变。因此，作者以该女童姓名的第一字母命名为PM病毒（PMV）。
    通过对3个相互重叠的PCR片段测序，获得PMV全基因序列，全长为3736个核苷酸。PMV核苷酸序列与TTV具有共同的特点，包括ORF1、ORF2及非编码区所在的位置。PMV多腺苷酸化信号(AATAAA)始于第3028个核苷酸处。PMV的ORF1最长，编码767个氨基酸，与其它TTVORF1的氨基酸序列同源性仅为31.1%，其N末端有一个富含精氨酸区，这与其他TTV相似。ORF2较短，与其他TTV的异源性较高，其平均氨基酸同源性为32.7%。PMV ORF1含起始密码子功能区（ACCATGG）,与Kozak[5]报告的最佳翻译起始序列仅差1个核苷酸。ORF2起始功能区含2个次佳核苷酸序列，其上游含保守的Sp1（GGGGGG）和Cap(CAATTC)位点。PMV的ORF3长为165核苷酸，与ORF1的C末端重叠40个核苷酸，但TTV基因序列中无特点。PMV ORF3与TTV TUS01和SANBAN平均氨基酸序列同源性为46.3%。
    从多腺苷酸化信号至ORF2的起始密码子（包括富含精氨酸区）是保守的非编码区。比较PMV与4株TTV（TA278、JA20、US35、TUS01）及1株SANBAN全序列表明，除TUS01株的非编码区长为1014外，其他4株的非编码区稀薄为1040个核苷酸，但PMV相同区段的长度只有972个核苷，最明显的截短处在富含GC区，PMV该区只有58个核苷酸，而TA278株为117个核苷酸。PMV的非编码区与其他5株TTV核苷列同源性为69.8%。
    Hijikata等[1]推测，在TTV的非编码区紧接多腺苷酸 信号下游形成枝襻结构，用同样方法分析，PMV的相应区段也有二级结构，与TTV结构极为相似，但PMV的富含GC区可能由于缺失的影响，其二级结构与TTV TA278株和TUS01株不同。
    应用PCR法检测99例供血员和98例非甲~戊型肝炎病人血清，分别为17例（17.2%）和32例（32.7%）阳性，其中32例获得可读序列，与TTV类似，但不是PMV，提示人群中PMV流行率较低。
    四、YONBAN病毒
    Takahashi等[6]应用PCR产物直接测序，从病人血清中获得4株YONBAN（日文意“第四”）几乎是全长的核苷酸序列，其与TTV原型株（TA278）和SANBAN的同源性仅为50%，与TLMV的同源性更低。该4株YONBAN病毒(KC009、KC186、KC197)及LCO11）非编码区均缺少富含GC区，其全序列长约3 600bp,各株间的同源性高达94.5%~97.0%。YONBAN病毒有3个ORF:th 5’端至3’端，ORF1编码带富含精氨酸氨基末端的糖蛋白，其氨基端富含精氨酸，缺少ATG起始密码子，但在相应位置上有一个GCCGCCACGG序列。由于ACG与上下序列符合Kozak规则[5]，因此，推测它可能有起始密码子作用。ORF2编码带WX^Sub7^HX^Sub3^CXCX^Sub5^H保守功能区蛋白。ORF3编码富含丝氨酸蛋白，该区YONBAN和TLMV均有ATG密码子，但不是所有TTV分离株均有ATG。根据ORF2上游非编码区序列建立的基因发生树分析表明，与TLMV比较，YONBAN与TTV关系更近，而CAV为一单独分支。但从ORF2氨基酸水平比较，YONBAN与TTV和SANBAN关系很远，这是由于YONBAN的ORF2氨基端序列被截断。关于YONBAN病毒在人群中流行率及其致病性问题未见报道。
    五、SEN病毒
    2000年意大利学者Primi等[7，8]从1名感染HIV的毒瘾者血清中分离到一单链DNA病毒，以该病人姓名的第一个字母命名为SEN病毒（SENV）。该病毒有8个成员，分别命名为SENV-A~H。
　　SENV、TLMV、TA278、SANBAN、TUS01、PMV及YONBAN的ORF全序列分析比较发现，SENV的ORF1氨基酸残基为642-762个，N末端富含精氨酸/赖氨酸区相对保守，与TTV原型株、SANBAN、YONBAN和CAV相似。SENV的ORF1具有3个Rep蛋白基序，其中SENV-A、SENV-C及SENV-H的羧基端包含一个亮氨酸拉链结构。8个SENV分离株的ORF1核酸序列与TTV TA278株存在33.1%-36.5%的同源性。与TTV TUS01、SANBAN、PMV及YONBAN之间的核酸序列同源性分别为39.3%-60.5%，46.1-78.6%，34.2%-37.1%及29.1%-36.1%，氨基酸序列的同源性低于核酸序列同源性。SENV的ORF2含有146-166个氨基酸，与TTVTA278株的同源性为33.6%-42.4%。ORF3与ORF1的3’端序列部分重叠，由81-88个氨基酸组成，含有一个TATA基序，位于ATG起始密码的上游。
    在不同人群中SENV流行率各异，在意大利健康献血员中流行率较低，在经血液传病发病率高的人群中流行率较高。SEVN-D和SENV-H在输血相关的非甲-非戊型肝炎病人中流行率较高，而在键康供血员中流行率较低。
    原型TTV及TTV相关病毒可分5个不同组:组1为YONBAN株；组2为原型TTV株；组3仅为PMV；组4为SENV、SANBAN及TUSO1；组5为新近从日本和中国他离的TTV毒株，如JT33-05、CT44-02.该5组病毒组成一群，提示它们是从一个共同的祖先进化而来。Takahashi等[6]认为，TTV、TTV相关病毒、TLMV和CAV可能组成一个病毒科（或超级科），虽然这些病毒对人几乎不致病，但在其众多成员中，某些病毒可能致病。在研究其致病性时，必须按各组的单个成员或同一小组内关系最亲近的成员进行分析。

                                        摘自《中华微生物学和免疫学杂志》2002年22卷第1期