----通常，支原体的检测主要依靠培养，进行菌落的显微鉴定（解脲支原体的菌落为海胆状，而人型支原体的菌落为油煎蛋样）。因为解脲支原体和人型支原体均为共生生存，所以感染的诊断则主要依赖于病理诊断和精确计数。

2·检测原理
----MYCOFAST® Evolution 2为一种液体培养基，需培养24小时后方能判断结果。解脲支原体和人型支原体在生长过程中，分解尿素和精氨酸产碱，PH升高，并在指示剂作用下，使培养基由原先的桔黄或黄色变为浅粉红色。
----MYCOFAST® Evolution 2的试验操作是在一块反应条板的两排平行的反应孔中进行的。每排的10个孔又分为4个部分：

----在用于解脲支原体计数的1-3孔内，加有洁霉素以抑制人型支原体的生长；而在用于人型支原体计数的第10孔中加有Erythromycin（E）抗生素，以抑制解脲支原体的生长。

3·试剂盒组成

4·注意事项
----该试剂盒严格用于体外诊断。
----标本及试剂具有潜在的感染性，处理时须特别小心；废弃物必须放入废物袋。
----不得混合使用不同批号的试剂盒。
----不得使用过期的试剂盒。
----试剂瓶的盖头不得混合使用，可能导致污染或错误结果。
----不同标本操作时须更换吸头。

5·标本的收集及处理
5·1阴道和子宫颈标本的采集
----使用达克龙拭子、细胞刷或其它专用器材采集标本。采集前，需用另一根棉签小心擦去外部粘液。支原体强有力地粘附在粘液细胞上，采样时必须保证拭子中含有足够多的粘液细胞。
----将采集好的标本接种在U.M.M.t中，丢弃拭子。
5·2尿道标本的采集
----清洁尿道口后，用拭子刮取尿道壁上细胞。
----将采集好的标本接种在U.M.M.t中，丢弃拭子。
5·3尿液和精液的采集
----用无菌小瓶或试管收集精液和首段尿。
----吸取200ul混匀的精液或尿液接种在U.M.M.t中。
5·4胃泌物
----利用导管吸出新生儿的胃泌物，并转移到一无菌瓶中。
----吸取200ul胃泌物接种在U.M.M.t中。
----接种好的培养基可在室温下保存8小时，或2-8℃保存36小时。

6·试剂的预处理及保存
----所有的试剂均可随时用于试验。瓶装试剂均可在2-8℃保存至有效期结束。必要时U.M.M.t培养基可保存在室温中，但稳定性没有在2-8℃保存时好。
----所有的试剂均不可冰冻。
----如果MYCOFAST® Evolution 2检测板使用了一半，剩余的另一半可在原先的包装中于2-8℃保存3星期。

7·需要但未提供的器材
----标本采集器材（达克龙拭子、细胞刷等）
----无菌容器
----废物袋/箱
----石蜡油
----35-37℃孵育箱

8·检测过程
----注：MYCOFAST® Evolution 2试剂盒的所有试剂均含有抗生素，以消除杂菌，因此操作时，不需在无菌环境中进行。
8·1试剂的预处理
----试验前取出所需试剂，平衡至室温。
----MYCOFAST® Evolution 2检测板：一块板可用于两份标本的检测，因此最好能同时进行两份标本的检测。如标本数为单数时，可将检测板一分为二，另一半尽快用于下次试验。
----U.M.M.lyo瓶：和其它试剂瓶一样进行预处理。
8·2U.M.M.lyo瓶的接种
----将已经接种在U.M.M.t培养基中的标本全部倾倒于一新鲜的U.M.M.lyo瓶中。接种好的U.M.M.lyo培养基为橙色。
----充分混匀。
8·3MYCOFAST® Evolution 2检测板的接种
----成排打开反应孔上的粘附的胶片。
----按照下面操作进行加样：
--------孔1-10 每孔加入100ul的U.M.M.lyo培养基
--------孔9-10 加入2滴M.h.supplement营养补充物
--------孔1-10 加上2滴石蜡油
----重新将反应孔上的胶片粘上。
----剩余的U.M.M.lyo培养基在瓶中保存至少48小时，以辅助判断。
----同样进行第二排孔的接种。
8·4孵育
----将检测板在35-37℃孵育箱中孵育24小时，观察结果。必要时，尿液、精液及胃泌物需要连续孵育72小时。

9·结果判断及解释
9·1确认观察
----观察每排的10孔中的培养基是否清澈。如出现云雾状浑浊，则显示可能是细菌性污染。如出现该情况，应重新进行检测。如该情况持续出现，请与当地供应商或本公司联系。
9·2结果判断及解释
----结果的判断主要依赖于不同孔中的颜色变化。培养基变成浅粉红色（碱性），指示生殖道支原体生长。无支原体生长时，培养基为黄色。
9·2·1计数
----注意计数孔的颜色变化，并用下表判断结果：

9·2·2鉴定
----支原体类型的鉴定同样根据特殊反应孔的颜色变化所进行的。根据孔7、8、9的颜色变化即可进行大概的鉴定。

9·2·3强力霉素（8ug/ml）、Roxythromycin（4ug/ml）、 诺氟沙星（4ug/ml）的药敏试验
----耐受结果：当反应孔中培养基颜色变为浅粉红色时，指示该支原体株对该孔中的抗生素具有耐药性。
----敏感结果：当培养基颜色为黄色时，表明该孔中的抗生素抑制了该支原体的生长。
注：
* 抗生素耐受试验孔中不含有人型支原体的营养补充物，当人型支原体呈现阳性结果时，请于孵育48小时后判断结果。
* 解脲支原体在尿液、精液和胃泌物中的计数无实际的临床意义。在这些标本中检查出解脲支原体即可进行肯定性诊断。

10·特殊情况
----当标本中存在大量解脲支原体和人型支原体时，所有的反应孔将都变为粉红色。此时进行稀释重新试验。
* 排除细菌污染的可能，检查反应孔培养基清澈。
* 取出原先保存于2-8℃的U.M.M.lyo培养基，吸出200ul接种于一瓶新的U.M.M.t培养基中。
* 取出一瓶新的U.M.M.lyo培养基，与新的U.M.M.t培养基混匀配制。
* 接种一条新的MYCOFAST® Evolution 2检测板。
* 利用稀释倍数报告结果。

11·局限性
----因为所有的检测均为微生态检测，检测结果很大程度上依赖于标本的采集，所以，一次的阴性结果并不能确定没有感染。
----MYCOFAST® Evolution 2的阳性结果指示生殖道支原体的出现，但并不能作为充分的临床诊断依据。临床的诊断需要实验室的诊断结果与临床症状相结合。

12·技术指标
----MYCOFAST® Evolution 2与A7琼脂的对比结果如下：

比较结果显示，MYCOFAST® Evolution 2的检测灵敏度较A7琼脂高。