微生物鉴定系统及其选择和评价
四川大学华西医院检验科 陶传敏 过孝静 综述 李萍 审校 摘要：微生物鉴定系统在临床实验室的感染性疾病诊断和治疗过程中发挥着越来越重要的作用。本文比较了常用微生物鉴定系统的原理及性能，从如何选择和较全面地评价鉴定系统及其局限等方面进行了综述。
关键词：鉴定 微生物 自动化 评价
医院感染日益突出，快速、准确鉴定病原微生物已成为临床的迫切需要。20世纪60年代以后，微生物学家和工程技术人员合作，逐步开发了微量快速培养基和微量生化反应系统。至80到90年代发展迅速，并广泛用于临床。1999年底法国梅里埃公司推出VITEK2系统，从接种物稀释、密度计比较及卡冲填和封卡等步骤均实现了全自动化（1）（2）。微生物鉴定自动化方法，包括(1)临床微生物鉴定系统；(2)气液色谱分析；鉴定厌氧菌和分析杆菌多用于研究；(3)核酸杂交；多用于研究；(4)化学发光技术；可鉴定一些细菌、少数分枝杆菌属和一些真菌。本文重点综述临床微生物鉴定系统。
1.临床微生物鉴定系统的原理及性能比较
临床微生物鉴定系统使细菌鉴定过程规范化和程序化，将细菌对底物的生化类型与已建立数据库类型相比较。测试原理主要是利用物质产生pH变化，能释放色源或荧光源复合物的酶学反应，四氮唑标记碳水化合物代谢活性的产生，挥发或非挥发酸产生，或可见生长（3）（4）（5）。
采用上述原理的各种鉴定系统可鉴定肠杆菌科，非发酵菌，革兰阳性球菌，革兰阴性球菌，厌氧菌和酵母菌（6）（7）。目前较完善的鉴定系统性能比较见表（8）。
2.选择标准
微生物鉴定系统通常十分昂贵，购买之前须咨询有关专家，考虑如下问题(9)。需要考虑的问题包括：
A为什么需要一个新系统?新系统能否给实验室或医院带来效益?
B是否有能力维持该系统?资金足够吗?
C是否真正需要“快速”系统?早出报告能及时送到医生处并采取必要的诊疗措施?
D根据什么做最后的决定?对系统还存在什么疑问?
E购买还是租用，以及试剂消耗量的偿还方式?
上述诸点明确之后，便可寻找合适的鉴定系统。通常在没有充分把握的情况下，最好不要成为一种新产品的第一个用户。向厂家索要尽可能详细的资料，看该系统能够鉴定细菌种类是否满足临床需要。了解和咨询过程中，须侧重了解如下诸方面的情况：
(a)系统总的质量如何?公司的售后服务如何?
(b)鉴定准确度如何?抗生素敏感试验准确度如何?(拿出文献资料来证明)
(c)试验准备和完成试验时间多长?完成试验时间及试验成本?质量控制时间和成本?
(d)试剂盒保存期多长?贮存要求如何?贮存空间足够吗?
(e)本地区还有谁使用同样的系统?打印的报告单是否适用?系统所提供功能实用吗?
(f)系统能与我们实验室的计算机系统相互配合吗?系统是否与本实验室计算机兼容?
(g)系统可扩展吗?软件如何升级?免费吗?是否易受电压不稳定的影响?
(h)需要多长时间的技术培训?厂家可提供多长时间的技术培训?
(i)要多少空间?系统重多少?将引起我室工程结构问题吗?需要特殊电力供应吗?
如果可能，走访一下规模相同的实验室用户，了解该系统的性能。询问他们是否喜欢?是否还会购买它?安装需多长时间?经常出故障吗?技术服务如何?与使用者讨论服务能力和试验系统的可靠性。
选择一个已完全被评估的系统，且它在鉴定你医院中常见和不常见细菌准确性超过90％，常见分离株鉴定准确性应不低于95％。应当注意，虽然营养要求更高的微生物已被列入制造商的数据库，但一些系统是不能准确鉴定。对于能做抗生素敏感试验的系统须考察抗生素敏感的准确度。因为抗生素种类繁多，抗生素－微生物相互作用很复杂，正在出现的新耐药机理问题，准确度的评价更须认真仔细。
3评价
评价鉴定系统首先应从已发表文献中寻找第一手证据。仔细阅读，要特别注意，其实验设计是否科学，详细考虑文中的数据，看是否确实支持其结论。这很重要，不要只看摘要。否则可能会得出错误结论。在以“金标准”或另一系统作为参照标准评价某个系统时，要十分注意实验设计的严谨，否则也会得出错误结论（10）。当介绍新产品时以其它商业产品为金标准可能是可接受的，但这种比较将不能揭示系统真实的准确性因为所有商业产品都有一些弊端或弱点。
由于鉴定系统给出的是定性结果，评价系统优劣的指标是准确度。确定准确度往往需要几百株微生物的试验，这对于小规模实验室是一项很困难的工作。对这类实验室，要求实验室人员按系统的要求操作，需达到文献中的准确度。新系统的准确度应该与“金标准”或参考方法的符合率在95％，不能低于90％。如果是以新系统取代原有系统，新系统的准确度必须高于原系统。较全面评价一个新系统，需包括以下内容。
A新系统与参考方法做平行试验(最少50次)，测定质控菌株，持续一周。两种方法的符合率在90％以上。不符合结果应由参考实验室判定。
B测定2－3种常见的已知菌株，小型实验室测50次，大型实验室测100次。
C选择12－15种微生物20－50株进行鉴定，其结果与参考方法相比较。
4局限
系统准确性仅受现存数据库版本限制，如果版本可能过时了，实验室技术人员需要向医生解释不能做某个分析要求或结果可能被推迟或甚至不准确的原因。因此数据库必须经常修正纳新命名的菌种。当出现不常见生化谱或者出现不期望的药敏谱时，实验室操作手册必须规定候补方法来完成准确鉴定，否则分离株应送至参考实验室进行分析（4）。另外还应注意制造商的信息交流和其它使用者遇到的潜在问题。
总之，微生物鉴定的自动化可以缩短微生物鉴定时间，并可促进实验室内和实验室间的标准化，但是它的试剂消耗费用、一次性设备投入都很高，在某些情况下其结果还需要候补方法来确认，因此在选择系统时需从多方面进行全面的、详细的考察，同时应做较全面的评价得出真实可靠的结论。今后仍将致力于发展更短分析时间的试验方法，使快速报告能在更短的时间内产生。
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