蒋燕群 卫国 倪语星
[摘要]目的提高血培养、无菌体液培养阳性率，快速、准确地作出病原学诊断。方法用BACTEC-9120全自动血培养仪对1000份血液和体液标本进行检测，针对不同年龄患者对象选用标准需氧瓶、厌氧瓶和儿童专用培养瓶进行增菌培养。 结果 培养时间缩短至5天，培养阳性率为14.9%，假阳性率4.0%编者案，污染率0.9%，其中血培养阳性率12.7%，体液培养阳性率26%。共检测出43种菌，凝固酶阴性葡萄球菌的比例高达41.6%。 结论 用BACTEC-9120全自动血培养仪提高了血培养、无菌体液培养阳性率，缩短了培养时间。
败血症是严重的全身性感染，病情复杂多变，进展迅速，病死率较高，但有时并无特异的临床表现，因此血培养阳性是确诊败血症的重要依据。大部分病人血液中的细菌数量很低，特别是在感染早期或抗生素治疗后，通常小于ICFU/ml[1]，所以提高血培养阳性率，快速、准确地作出病原学诊断，一直是临床微生物实验室的重要课题。我们用全自动血培养仪（BACTEC-9120）培养1000份临床血液、无菌体液标本，报告如下。
材料和方法
材料
1、标本来源：（1）来自我院1996年5月~1998年4月住院患者：临床血液标本864份，体液标本136份，其中腹膜透析液121份，骨髓8份，胸腹水5份，羊水、穿刺液各1份。（2）标本采集，注意事项：严格掌握抽血时间：要求在患者出现临床症状时尽快抽血，最好在患者高热、寒战时；抗生素治疗前或下一次抗生素使用前，无菌抽血。抽血量：成人：8-10ml，儿童：1-3ml。尽量避免采血量不足。并尽量在24小时内采3份标本，以提高标本的可靠性和阳性率。
2、仪器：全自动血培养仪（BACTEC-9120）：BEC-TON DICKINSON 公司产品。全自动微生物鉴定系统（VITEK-AMS）：法国生物梅里埃公司产品。
3、BACTEC专用血培养瓶有需氧和厌氧血培养瓶（aerobic,anaerobic）和儿童专用瓶（pediatric）3种。
4、VITEK-AMS专用细菌鉴定卡：包括GNI、GPI、YBC、ANI。方法采取患者的血液和体液标本，按BACTEC操作规程加入相应的血培养瓶，成年病人用需氧和厌氧瓶1对，儿科患者用儿童专用瓶。
培养阳性报警后，接种血平皿和伊红美蓝平皿。
鉴定：按VITEK操作程序进行。
结果判断：当仪器提示阳性，转种培养有细菌生长，为阳性；当仪器提示阳性，转种培养无细菌生长，为假阳性：凡仪器监测5天无细菌生长，判为阴性。
结 果
1、分离菌株和种类：1000份血及体液标本中共分离出149株菌，其中占比例最大的革兰阳性球菌，共有86株（57.7%），其次为肠杆菌科细菌，有35株（23.6%），非发酵菌6株（4.0%），真菌和厌氧菌分别为16株（10.7%）和6株（4.0%）见表1
a： 包括轻型链球菌、草绿色链球菌、坚忍链球菌各1株；b：包括催产克雷伯菌、中间肠杆菌、聚团肠杆菌、异型枸橼酸杆菌各1株；c：包括粘膜黄杆菌、洛菲不动杆菌、鲍曼不动杆菌、木糖氧化无色杆菌各1株；d：包括平滑念珠菌、土生念珠菌、罗伦特隐球菌各1株；E：包括星座链球菌3株、中间型链球菌2株、消化链球菌1株。
2、血液、无菌体液细菌培养结果：1000份标本中，有158份分离出细菌，其中149份有临床意义，阳性率为14.9%；有9份考虑为标本污染，占0.9%；还有40份标本仪器提示为阳性，但未分离出细菌，定为假阳性，占4.0%。血培养阳性率占11.0%，腹膜透析液培养的阳性率占3.6%，胸腹水、羊水和穿刺液的阳性率各占0.1%。
3、阳性检出时间：1996年11月~1997年6月从376份标本中分析了培养阳性的78株菌的检出时间，其中52.6%的细菌在24小时内检出，40%的链球菌和62.5%的真菌在48小时后检出，值得注意的是56.3%的假阳性是在48小时后报警的 表2 讨论
为了提高血培养阳性率，缩短培养时间，本实验室采用BACTEC-9120进行振荡培养和检测，由于该系统是利用细菌的代谢产物CO2被感应器内的荧光物质吸收后激发出荧光，并每隔10分钟测试1次，经设定的程序自动进行计算、判读、记录生长曲线和报警，因此培养阳性率从常规培养法的10.8%提高到14.9%，24小时内的阳性检出率为52.6%，阴性报告时间从7天缩短到5天。此外我们还尝试将该系统用于腹膜透析液、羊水、骨髓等无菌体液的培养，腹膜透析液的培养阳性率高达29.8%。
近年由于抗菌药物的普遍使用及医学技术的发展，使败血症的致病菌种类有了较大变迁[2.3]，条件致病菌所致败血症、真菌败血症及厌氧菌败血症等有增多的趋势。我们在1000份血及无菌体液标本中共分离出149株菌，分布的范围很广，涉及43个菌种，其中除少数为致病菌（金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、沙门菌等）外，大多数为条件致病菌，占90.6%，血浆凝固酶阴性葡萄球菌导致的败血症有62例，占41.6%，有明显上升趋势，这些细菌的感染往往与侵袭性操作有关，该菌产生的粘质有利于细菌吸附在塑料上，也能干扰宿主的免疫应答[4]。
本研究显示65.7%的败血症继发于其他疾病，各种慢性疾病如肿瘤、慢性肾病、肝病及代谢性疾病等，由于免疫功能减退，使患者较容易受到感染而生败血症，免疫抑制和广谱抗生素的应用，更加快了这一变化。
由于血细胞的代谢也能产生CO2，激发荧光，本仪器设定的程序虽可排除一般的血细胞呼吸干扰，但是在一些细胞质和量异常的情况下可出现偏差。我们分析了30例假阳性的病例，发现血液病病人的假阳性率较高。从表2可见56.3%的假阳性出现在48小时以上，而真阳性标本在24小时以内的阳性检出率为52.6%。但我们不能排除由于培养条件不足所导致的分离培养假阴性，因此当仪器提示阳性，而分离培养阴性时，应转种巧克力平皿，置CO2环境内培养，有条件的最好做细菌L型的培养。如用BACTEC专用树脂瓶，更能起到中和抗生素，提高培养阳性率的作用[5-7]。
至于污染菌的判定，排除了专性致病菌外，须与临床联系，凡与临床症状和原发病灶的病灶的病原菌不符，两次培养未能证实同一细菌的才能定为污染菌。 编者案
该篇文章报告假阳性率为4.0%,明显高于其他相关报道,作者提到其假阳性判断标准为: 培养阳性报警后，接种血平皿和伊红美蓝平皿,放于普通孵箱, 平皿无细菌生长，为假阳性。同时作者在讨论中也提出：“我们不能排除由于培养条件不足所导致的分离培养假阴性，因此当仪器提示阳性，而分离培养阴性时，应转种巧克力平皿，置CO2环境内培养。”作者的评价是非常客观和科学的。大量其他临床文献显示，培养阳性报警后，接种血平皿和巧克力平皿,放于CO2孵箱, 可以大大降低原来以为的假阳性。这一点值得引起我们广大的使用全自动血培养仪的用户的注意。
摘自：《BD微生物检验专辑》
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