广东佛山市中医院检验科  梁鹏

 　免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，因而在临床检验领域中倍受重视，发展迅速，成为检验方法中最为重要的技术之一。随着抗体和抗原制备技术的成熟及标记技术的发展和完善，免疫分析技术作为疾病诊断的主要手段已被广泛应用于机体免疫功能、肿瘤标志物、内分泌功能、传染性疾病、治疗药物监测、过敏原检测等体外诊断实验中，其中血凝技术、酶联免疫吸附实验技术、放射免疫分析技术、荧光免疫分析及胶体金技术等已被大量地应用于检验科的日常工作中。

　由于临床检验工作量不断增加，疾病传染性对工作人员构成的危险因素加大，同时对工作效率要求越来越高，因此对检验自动化要求越迫切。七十年代起自动生化分析仪开始出现在临床实验室，到了九十年代免疫分析技术已日趋成熟，荧光偏振、时间分辩荧光、电化学发光等分析技术不断引入到免疫分析系统，这些免疫分析技术不但有较高灵敏度，而且特异性也较好，具有一定的抗干扰能力。

　1、荧光偏振（FPIA）：用荧光素标记的示踪物与分析物的复合体经单一平面偏振光照射后，可发出单一平面的偏振荧光，此荧光在特定偏振面的强度与复合体受激发时的转动速度成反比，而转动速度与分子量的大小成反比。当荧光标记的示踪物与分析物的复合体结合后，分体对相应大分子抗体进行竞争性结合，使游离的复合体增多，而复合体转动速度较高，这样在特定偏振面上检测到的荧光强度较低，反之检测到的荧光强度就会较高。因此通过检测在特定偏振面上的荧光强度的高低就可得到待检血清中分析物的浓度。这种方法的优点是灵敏高，线性范围广，有较好的精确度。此项技术的专利已被雅培公司买断，他们生产的IMX、AXSYM免疫分析系统均采用此种原理的免疫分析系统。

　2、时间分辩荧光（TRFIA）：这是由芬兰EG&G公司生产的自动免疫分析仪率先采用的检测原理。原理和荧光免疫分析基本相同，只是标记物和信号的测量不同。采用三价稀土离子做示踪剂，如：EU3＋，SM3+等。稀土离子通过螯合剂与抗体分子上的游离氨基共价结合，形成稀土离子－螯合剂－抗体标记螯合物，用建立双抗体夹心免疫分析。当采用酸性增强液将稀土离子从免疫复合物中解离出来，并与增强液中的主要成份形成微囊，当被激发光激发后，稀土离子可以发出长寿命的极强的荧光信号。主要优点为1、由于稀土离子荧光激发光波长范围宽，发射光波窄，激发光和发射光之间有较大的位移，因此有利于提高激发能。排除非特异荧光干扰，增强荧光信号的特异性。2稀土离子标记螯合物具有较高的稳定性，标记离子不易脱落，稳定期可达1-2年。3、由于稀土离子螯合物所产生的荧光不仅强度高，而且寿期长，因此利用延缓测量时间，可以排除待测样本或试剂中短寿合的自然荧光干扰。

　3、电化学发光（ECL）：基本原理与化学发光相同，与普通化学发光技术的不同在于采用特殊的标记物：联吡啶钌（Ru(bpy))2+。在三丙胺阳离子自由（TPA＋）的催化及脉冲电压的激发下，此标记物可产生高效、稳定的边续发光。同时，由于（Ru(bpy))2+。在反应中可循环利用，使发光得以增强和稳定。这种方法的主要优点是标记物分子小且稳定性较好，发光强度高，发光时间长。德国宝灵曼公司ELECSYS系列的自动免疫分析仪就是采的电化学发光原理。

　4、增强化学发光（EC）：将生物素化的（Biotinylated)第一抗体通过亲合素（Streptavidin)包被于反应杯内表面上，当待测物与之结合后，再加入用辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP)标记的第二抗体，与普通化学发光原理不同之处是采用了一种特殊的催化剂与发光醇（Luminol)及其它试剂一道加入后，可使辣根过氧化物酶氧化发光醇的反应速度提高103倍以上。从而使方法学的灵敏度大大提高。美国强生公司拥有一种特殊增强剂的专利，并新推出的VITROS Eci全自动免疫分析仪。

摘自：医学检验在线