李杰

    沙眼衣原体(Ct)除了引起沙眼外，目前已成为性传播疾病的重要病原体而日益引起人们的重视。但Ct感染常无症状或无特异症状而容易被人们所忽视，建立一种快速、敏感、特异的检测方法就显得非常重要。目前沙眼衣原体的培养检查法是经典的检查方法，但由于需要特殊的设备及试剂且实验方法复杂，技术要求高，费时且费用较高而并不适合临床应用。

    目前检测衣原体技术发展很快，方法日渐增多。检测抗原的有改良荧光检测法，金标男女两用衣原体快速检测试剂盒，分子生物学技术应用于检测衣原体的方法更是日新月异，（1）连接酶链反应（LCR），（2）转录介导的扩增试验（TMA），（3）酶放大免疫反应（PCE），（4）聚合酶链反应（PCR），（5）半巢式聚合酶链反应—微空板杂交法，（6）巢式聚合酶链反应，（7）实时荧光聚合酶链反应定量检测。

    改良衣原体荧光检测法将标本涂于载玻片上，然后以甲醇固定10分钟再将荧光抗体染液滴于标本上，置湿盒中于37度温箱孵育30分钟后冲洗，晾干，镜检。改良后利用过氧化氢的氧化作用加速抗原抗体反应，大大缩短了试验过程，其过程如下：用记号笔在玻片背面划一小区，将标本涂于正面载玻片上所划小区内，然后滴加甲醇3滴，2—3分钟后甲醇挥发，标本即固定好。用微量移液管加荧光抗体染液20微升，在加20微升过氧化氢（30%）于染液上，轻摇混匀，放置5分钟后，冲洗，晾干，封片镜检所需时间仅为20分钟。

    快速检测泌尿生殖道衣原体抗原的免疫法，标本经加热使衣原体脂多糖LPS单克隆抗体结合，形成的复合物通过毛细管作用移动到结果窗，可被该处的未标示的鼠抗体LPS单抗所捕捉，在结果窗形成蓝色带，过剩的未结合的带色乳胶标记的鼠抗衣原体LPS单抗体移动到质控窗，于该处的兔抗鼠抗体相结合显示蓝色带。

    连接酶链反应属于一种探针扩增技术，是依赖靶核苷酸序列的寡核苷酸探针的连接技术，这种方法应用4种寡核苷酸探针（即两对互补的引物），当他们在体外结合到靶序列上以后，用耐热DNA连接酶将他们连接起来。两条探针被连接上以后，又可以作为新的模板。由于使用两对引物，LCR比PCR具有更高的敏感性和特异性。

    巢式聚合酶链反应（nPCR）也称套式PCR。在这种技术中，首先用一对外引物进行第一轮PCR，然后再使用第一对引物扩增的DNA序列内部的一对引物再次扩散，所以称为巢式PCR。由于使用了两对引物并且进行了两轮扩增反应，因此试验的敏感性和特异性均增强。在一定情况下，这种方法对减少后扩增产物的污染问题极为有用，但他增加了每次试验的复杂性。为了经济节约可在第二轮扩增时采用半巢式，设计单条引物，另一条引物与第一轮扩增共用，效果也优于单次扩增。

    实时荧光聚合酶链反应定量检测是在普通PCR扩增系统中加入一个与靶基因序列特异互补的双荧光标记探针。5/端标记荧光发射集团，3/端标记荧光淬灭集团，当探针完整时，后者抑制前者而不发光。有靶基因存在时，在PCR复性阶段，探针与靶基因互补，PCR延伸中，由于Taq酶有5/ --- 3/的外切酶活性，引物沿模板延伸至标记探针结合处，将5/端报告集团切下，产生荧光，其强度与PCR产物量成正比关系。荧光光谱分析仪可测得定量结果，他可反应原始模板定量。

   随着对衣原体的认识进一步加深，对衣原体耐药株的药物敏感性的研究也快速发展起来。英国学者Lefevre JC从一例无症状女性患者体内分离得到图卢兹第一株耐四环素衣原体菌株，并比较了该菌株于从其他患者分离得到的34株菌株在体外对四环素、氧氟沙星、红霉素、阿齐霉素、多西环素和普那霉素的敏感性，即最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）结果表明：所有沙眼衣原体株对出四环素以外的其他抗生素体外敏感性没有差异，对阿齐霉素、红霉素、氧氟沙星和普那霉素均敏感。作者在讨论中指出该耐四环素菌株不同于美国报道的对多种抗生素耐药的“异型”菌株，他在体外对阿齐霉素、红霉素、氧氟沙星和普那霉素均敏感，这是一个新的现象。

   另外，英国学者Tyndall MW等在肯尼亚某计划生育门诊采用危险因素评分、体检、显微镜检查和尿白细胞酯酶试验对无症状女性进行淋病奈瑟菌和沙眼衣原体感染的预测，该研究已病史和人口统计学资料、体检所见、显微镜检查和尿白细胞酯酶检测为基础，建立一个简单的评分系统以预测物证装女性淋病奈瑟均和沙眼衣原体的感染情况。作者指出：单位和连用危险因素、评分、体检、显微镜检查和尿白细胞酯酶在低危无症状女性中预测宫颈淋病奈瑟菌和沙眼衣原体感染是不适用的，有必要进行准确的诊断试验，以保证有效的治疗。此方法是用于不发达地区高危人群组的女性。

   综上所述，近几年发展起来的改良荧光检测法、金标男女两用衣原体快速检测试剂盒的出现，为临床应用提供了快捷、实用的方法。分子生物学方法为进一步提高检测的准确性、敏感性以代替培养法检测衣原体提供了一种男女均适用的非侵害性的灵敏的快速的诊断试验，在检测衣原体诊断泌尿生殖道感染中有着重要的临床意义。

摘自：《医学仪器与试剂》2002年4期