张世俊，张金树，高德路（中国人民解放军第305医院检验科，北京100017）
 
   高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的匀相直接测定法（以下简称直接法）有不需要血清标本预处理的优点，适于直接上自动分析仪检测，为广大检验人员所乐不采用。直接法中抗体包裹法，由于需要特异性抗体，采用者不多，目前多用的是三类方法，即选择性抑制法（SI法）、酶修饰法（EM法）及消除法。文献中对这类试剂的评价报告不少，实验结果与意见不安全一致，因此对这类试剂的评价和选用，仍是当前受关注的问题。
    1、 与〈两种直接测定高密度脂蛋白胆固醇的方法与沉淀法的对比〉的讨论
    我们读了贵刊屈步华等“两种直接测定HDL-C的方法与沉淀的对比”一文后，觉得从实验设计，结果及讲座等方面，有不少值得高榷的问题。为了共同切磋，特提出我们的看法。
    1．1  用自制纯高密度与低密度脂蛋白（HDL、LDL）与所选两种试剂反应，用来评价两种方法的特异性，虽具有一些参考价值，但不代表血清中HDL与LDL 的实际情况。血脂分析存在基质效应是众所周知的，HDL-C直接法测定中同样存在基质效应。合理的做法是用新鲜血清作HDL-C与LDL-C准确定值后观察与不同试剂反应的差异，也可考虑不同量的纯HDL与LDL加入新鲜血清中（总含量不超过方法的线性范围）观察脂蛋白在血清中的反应情况。
    1．2 屈步华文中所用SI试剂不指明厂名、批号是不妥的。不同生产厂商的试剂虽属同类方法，但配方与使用性能方面会有很大差异。商品试剂之间的评价不等于方法间的评价，所以一种方法不应该只检测一种商品，而是应尽可能地多收集一些国内外同类商品试剂比较，包括名牌产品及其他，尤其是当前尚未提出试剂组成最适化及厂家相互之间保密的情况下有的公司不同批号之间就有差异；有些公司正在推行改进后的试剂，市场上会可能同时出现同一公司不同“版本”的试剂盒.作为方法学的评价应该在试剂的选择上更为慎重和周全.因而我们以为该文只能说明BM公司的EM法试剂与作者自选的沉淀法相符，而某一进口SI试剂与作者的沉淀法不符，但不能得出EM法优于SI法的结论。（注：屈步华文中称SI法为PPD法，EM法为PEGME法。）
    1．3 我们认为评价不同HDL-C商品试剂（或方法）的准确性，必须具备两个条件，其一是被测试剂与参考方法（超离心结合沉淀法）或经指定的比较方法（DS50-Mg2+）或我国检验学会推荐的PTA法比较；其二是必须有经参考方法定值的参考血清或经参考血清校正的校准血清。两者是评价方法准确性的基础。而该文作者显然不具备这两个条件，甚至不指明所用对比方法，只是含糊地说是“本中心自备试剂“，未免令读者置疑。
    1．4 作者没有参考血清，BM公司的校准血清属于商品，不宜用于准确性的对比。商品样准物只能用于特定的分析系统，与特定的试剂和仪器相配套，用于异源系统分析常能造成结果的偏差。
    1．5 对比实验只用7份正常血清，不符合规定要求。不同方法（商品）间比较必须有一定数量HDL-C、TC及Trig高低不等的标本，根据美国临床实验室标准委员批准的指南EP-9-A规定为40份，我国临床检验标准专业委员会也按此执行。
    1．6 收于缺乏精度度、线性、最低检测下限以及抗干扰能力的分析实验数据，也使作者的对比结果不能得出EM法优于SI法的结论。
    1．7 讨论中也存在一些问题。作者只引用了少数与作者意义一致的文章，未免有偏性。表1列举了近年来国外文献的评价结果，可以看出上述作者评价的EM法并非完全符合美国胆固醇教育计划（NCEP）对实验室准确性的要求，SI法与EM法不相上下。在不同实验室中即使用同种试剂也可得出不同的评价，其原因是多方面的，牵涉到所用试剂质量、设备条件、实验设计、技术人员素质及管理等综合因素。Warnick等近期的一篇综述报道了HDL-C测定方法从超离心到匀相法的演化，选择了具有代表意义的BM公司的EM法和日本第一化学药品株式会社（以下简称一化）SI法，从特异性、抗干扰性等诸多方面对两法均给予了肯定评价，同时认为试剂厂家针对特殊标本（高脂蛋白血症Ⅲ型和相关疾病）就进一步改善试剂性能。
 
    表1  文献报告的方法比较结果

    注:1.PTA:磷钨酸-Mg法;DCM:指定的比较方法（DS50-Mg2+法）；RM：参考方法，超离心结合肝素-Mn法；*超过NCFP偏差≤±5%的目标；Δ超过NCEP总误差≤±13%的目标
    2．Genzyme公司是日本一化（Daiichi）SI试剂的经销商。 Huang等文章投稿于1996年8月，实验日期估计为1996年上半年或以前，当时日本一化推出的选择性抑制法最早一产品，特点为主、副波长分别为546cm和660cm。Halloran等评价的是1998年改进后日本一化SI试剂。
    2、HDL-C测定试剂评价的建议
    根据以上所提的问题，为了今后做好HDL-C试剂评价工作，我们提出以下建议。
    2．1 掌握参考方法或实用的对比方法，DS50-Mg2+沉淀法是检测HDL-C的指定的对比方法，若无条件，可选用我国检验学会推荐的PTA沉淀法，但必须按推荐方法规定操作。
    2．2 须具备参考血清或准确定值的校准血清，切忌将商品校准液混用于非配套试剂，这是目前国内检验界的通病。定值血清的研究制问题是HDL-C测定标准化的关键。希望试剂厂家严格制备工艺和准确定值，同时请血脂专业实验室技术人员的给予监测。
    2．3 当前不少人在使用消除法，消除法试剂除英国朗道（Randox）、日本一化外，据说上海科华也已上市，预计商品SI法、EM法及消除法试剂将会在较长时间内并存。以一化为代表的SI法试剂在国内外应用较多，2000年在美国2546家实验室中进行了关于直接法使用情况使用情况的最近一次调查表明，63%选用了一化的SI法试剂，认为该试剂符合临床要求和NCEP对总误差的目标要示。今年一化公司大力推荐消除法。国外有些报告以为消除法的抗Tring能力优于其他直接法，今后作评价试验对应考虑消除法。
    2．4 评价试验应全面，除了干扰因素分析外，也应涉及线性、精密度与准确度等，方法对比要求40份以上的样本，包括血脂水平不同的标本，尤其是高脂血症和患有脂代谢相关疾病的病人标本。
    2．5 各实验室根据自动分析仪的类型和性能价格比所选试剂可能不同，其测试原理虽有差异，但要求结果准确一致，使实验室间有可比性，因此不论SI法、EM法或消除法试剂配方应符合标准化要求，使测定结果的准确性可溯源于参考方法。
    2．6 加强试剂生产的监督，可促进我国HDL-C测定标准化的进程。我国直接法试剂生产尚处于起始阶段，从原料购置到生产工艺SI法较其他直接法可行，现有的国产SI法试剂有的能够符合临床检测要求，有的仍存在不少问题。希望通过各实验室对不同方法及试剂的评价，使国内试剂市场走向有序运行，生产厂家应严格试剂配方质量，保证校准物的准确定值，尤其是对校准血清制备、剂型及基质效应等应作进一步研究，以不断完善直接法的测定。希望对HDL-C方法学的讨论有助于HDL-C检测水平，促进HDL-C测定标准化。

摘自：《临床检验杂志》2002年第20卷第2期