上海市临床检验中心 曹丹如 陈慧英

    酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked immunosorbent assay,ELISA）技术是利用抗原或抗体包被在固相载体上，用酶标记的抗原或抗体与其反应，形成酶标记的免疫复合物，加入特定的底物，在一定的条件下，酶与底物反应生成有色产物，且酶的降解底物和显色深浅是成正比的，可进行光密度测定，以达到检测抗原或抗体的目的。以前，在临床检验中，ELISA的测定通常用肉眼观察结果，不够客观，而且在临界值附近更是不易判断。随着ELISA技术的广泛应用，卫生部（卫药发1995）第32号文件规定，酶标试剂必须用酶标仪判定结果。对于目前临床上使用的各种品牌和型号的酶标仪，测定结果是否准确，是否符合临床要求，我们进行了初步调查和分析，现报道如下：

材料与方法

一、 重铬酸钾溶液的配制
    在0.1mol/L H2SO4中加入适量固体重铬酸钾，配制成重铬酸钾水溶液，摇匀，再按一定的比例稀释，共配制浓度①、浓度②、浓度③三个浓度重铬酸钾水溶液。

二、 酶标仪吸光度的测定
    选取单波长450nm或双波长450nm/630nm，用0.1mol/L H2SO4作空白，吸取150μl重铬酸钾水溶液浓度①、浓度②、浓度③，放入酶标板中，分别测定吸光度值。

结果和分析

一、135家医院酶标仪使用情况（见表1）：
    表1 上海135家医院使用的酶标仪的调查情况

    从上表可以看出，上海二、三级医院中，使用Labsytem Wellscan MK3和Elx-800的酶标仪最多，分别占21.5%和20%，其次是上海三科318型、labsystems Wellscan MK、Bio-Rad550和Biocell 2010,分别占9.6%、7.4%和5.2%，其余的不满3.0%。

二、酶标仪吸光度的检测结果：
    在135家医院中，除一家医院是用波长490nm比色和一家医院结果填写不完整外，其余133家医院在单波长450nm或双波长450nm/630nm处比色，经过3-4次去除超过±3SD的吸光度值，余下113家医院，结果如下（见表2）：
    表2 酶标仪吸光度值的统计结果

    从上表可以看出，吸光度值为1.425和0.707时，CV值分别为13.3%和13.2%，而吸光度值在0.215时，CV值就较大，达22.5%。

讨论与分析

    从统计结果来看，大多数医院的酶标仪符合临床实验要求，占83.7%。分析超过±3SD的20家医院，除去1家医院现与其他医院合并，无法追踪外，其余的19家医院中，4家医院将编号搞错，使结果错误：1家医院加样时污染，使结果偏高；14家医院的酶标仪有的没有及时进行维修保养，有的没有进行定期校准，造成了结果偏离，具体表现在有的酶标仪的空白值的吸光度值偏高，超过0.3，有的酶标仪的吸光度值的读数明显与肉眼观察不符，有的酶标仪的两次吸光度值的读数超过了仪器本身精度的要求。但由于我们在统计过程中，操作者的技能差异、加样器的误差、酶标板的差异以及各种酶标仪的差别，都对结果有一定的影响，所以，要对酶标仪比色结果的准确性和精确性作出评价，还需要做一系列的工作。
    在ELISA检测中，酶标仪已得到了广泛的应用，而且，酶标仪的种类繁多，性能不一，因此，在使用中，首先应考虑酶标仪的选择，可根据自己的财力、工作需要以及厂家的售后服务去选择。其次，应该对操作者进行培训，熟悉原理和操作，操作时认真仔细，增强责任性。第三，根据经验，选择酶标仪时其打印输出方式最好与96孔酶标板一致，而且空白能设置为零，这样能方便结果处理。第四，应重视酶标仪的维修保养和进行定期校准，对不符合要求的、性能欠佳的、无法维修的酶标仪应及时予以停用或更新。

摘自《临床检验及实验室设备》2002年下期