细胞分裂周期蛋白6（CDC6）是DNA复制起始和延伸的首要因子，是确保细胞在一个细胞周期中只复制一次的重要因子。肿瘤细胞是典型的恶性增殖细胞，在无序增殖的同时伴随着DNA复制，因而在肿瘤细胞中存在高表达的CDC6蛋白。聚合酶链反应（PCR）以敏感、特异为特点，在临床早期诊断中发挥巨大优势。量化监测CDC6基因对临床判断肿瘤细胞疾病进程和预后具有重要意义。铁道部北京铁路总医院中心实验室以beta－actin为内参基因，细胞分裂周期蛋白基因6（CDC6）为检测基因，探索半定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）体系在检测CDC6基因时的条件建立。　　

    方法：以膀胱癌细胞株为标本，提取总RNA，合成cDNA，优化PCR反应条件，建立针对CDC6的半定量PCR反应体系。结果：通过对实验参数的优化，确定适宜的反应体系：退火温度58℃、Mg2＋浓度2.0毫摩尔／升、循环次数37次；批内、批间变异系数分别为8.01％和14.53％，最小检测限为总RNA0.05纳克。通过重复性试验、敏感性试验和准确性实验分析，该方法具有良好的重复性、准确性和敏感性。　　

    结论：将内参基因与CDC6目的基因共同扩增，选择适当条件，可直接获得目的基因CDC6的mRNA的相对表达量。将细胞中恒定表达的结构基因作为内参基因，与目的基因一起经过相同的操作步骤，可对总RNA的提取和cDNA的合成进行监控，同时起到内部标准的作用。

摘自：中国医药报