卫生部临床检验中心    李金明

    临床分子诊断方法系指以蛋白大分子、化学小分子和核酸分子为检测目的物的手段，具体方法主要包括酶免疫试验、放射免疫试验、荧光免疫测定、化学发光免疫测定、斑点金免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等免疫测定方法，以及聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应（LCR）、转录依赖的放大系统（TAS）和核酸杂交等基因检测方法，无疑将成为21世纪的主导检验技术。　　

    从理论上说，一种生物或生理活性物质，只要有办法得到其特异抗体，就可以建立这种物质的免疫测定方法。以前看来难以进行质量测定的微量生物活性物质，如受体、细胞因子以及酶等，均可使用免疫技术来测定。免疫测定方法是以抗原抗体间的特异反应为基础，与临床生化的化学反应有本质区别，并且由于标记物如同位素、酶、荧光素、微量元素、发光物质等的掺入，免疫测定技术从低灵敏的免疫沉淀和免疫凝集反应进入到高灵敏的放射免疫、酶免疫、荧光免疫和发光免疫测定时代，可见免疫测定更多的是用于生物活性物质的微量测定。核酸是生命现象的基础，受体、细胞因子、酶、激素等不过是发挥功能作用的表型。在核苷酸序列上哪怕是单个碱基的变异，都会引起表型的完全改变，导致疾病的发生。因此在基因水平上检测，对临床疾病本质的揭示就要更深一步。　　

    目前在临床上，很多重要的疾病诊断标志物均使用免疫或分子生物学测定方法来检测，如抗HAVIgM、乙肝“两对半”、抗HCV、抗HIV、梅毒抗体、优生优育TORCH系列、性病病原体的抗原或抗体等传染性病原体血清标志物、激素、肿瘤标志物、自身抗体、特种蛋白、细胞因子和治疗药物以及HBVDNA、HCVRNA、遗传病基因、肿瘤基因、基因突变等，这些标志物的检测质量直接关系到患者的临床诊断和治疗。而在血站，HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体等标志物的检测，哪怕是1％的错误，对将要接受输血的特定患者来说，就是100％的灾难。近期常可见有关医患纠纷的报道，其中一些就与我们的免疫及PCR检验有关，如输血后丙肝病毒、艾滋病毒感染的发生，性病检测的假阳性等。可见，临床免疫和分子生物学检验的质量控制有多么重要。　　

    质量控制有室内质量控制（IQC）和室间质量评价（EQA）两个方面。IQC强调的是统计学质量控制。质量保证的概念用在临床免疫检验中可改为，为临床免疫检验报告提供充分可信的措施，即对涉及可能影响测定结果的每一步骤都要写出标准操作程序（SOP）和有效的室内质量控制方法。　　

    我们知道，当病人到医院看病，在医生确定检测项目以后，病人进行适当的准备，收集好的标本运送到实验室，由实验室接收及编号，并按要求进行适当的预处理后，就进入测定程序。如不即时测定，则标本必须有适当的保存。测定后，要判断测定的有效性。有效，则发出报告。上述任一步骤不当，均会影响测定结果及病人临床诊断和治疗，均为质量保证应涵括的范畴。此外，现在IQC的含义也有所扩展，主要包括三个方面：（1）测定前的质量控制；（2）统计学质量控制；（3）质量控制的评价。试想如果实验室仪器设备处于非良好状态，或检测试剂达不到质量要求，或技术人员操作水平低下，测定质量又从何谈起。　　

    临床分子检验如酶免疫试验和聚合酶链反应（PCR）有两类：定量测定，一般沿用通常的临床化学室内质控作法即可，定性测定，其结果是“有”和“无”，即“阳性”和“阴性”之分，因此，完全套用上述定量测定质控规则就不太合适。使用弱阳性质控物定性测定在作图时，可用S／CO值表示测定结果，而使用稍强一点阳性质控物则以吸光度或S／CO值表示均可。必须强调的一点是，弱阳性样本必须测定为阳性，因为定性免疫测定有一定的灵敏度（测定下限）是对其最基本的要求。通常所遇到的问题是，使用不同批号试剂，所得到的 S／CO值有较大差异，因此每换一个批号的试剂，质控图就不得不重新开始绘制，使得质控难以持续进行。这样，就需要对目前的质控作法进行改进。当然，以Crubs异常统计值取舍为基础的所谓“即刻法” 也是可以循用的。　　

    EQA的英文直译是外部质量评价，IQC的核心含义就是在实验室内由本室工作人员所采取的质量控制措施，它决定了即时的测定结果是否有效及报告能否发出。而EQA却是对实验室测定结果的回顾性评价。可以预见，我们国家的临床实验室在不久的将来，也将逐步进入规范化和法制化的管理，参加室间质量评价的结果当然就会成为实验室认可的重要依据。

摘自：健康报