河北医科大学第二医院检验科  李彦会　刘永春　李伟皓 刘晓雷
河北医科大学第二医院儿科研究室  李伟　张会丰
伦敦圣托马斯医院维生素K研究室   M. J . Shearer

    伴随凝血酶原前体蛋白( Proteins Induced by Vitamin KAbsense of Antagonist ，PIVKA2 Ⅱ) 的发现，机体维生素K营养状况有了敏感指标,他能从生化水平反映机体的维生素K状况，较之传统的凝血功能指标,凝血酶原前体蛋白更能反映机体亚临床维生素K缺乏状况。

    目前国内已建立了PIVKA2 Ⅱ检测的EL ISA 方法,而检测前标本不同处理方法对检测结果是否存在影响及影响大小，尚未见报道，为此我们进行了对比实验。

一、材料与方法

1. 试剂　109 mmol/ L 枸橼酸钠溶液；6250 单位/ ml 肝素钠注射液(天津市生物化学制药厂) ；PIVKA2 Ⅱ EL ISA检测试剂盒(河北医科大学第二医院儿科维生素K研究室提供) 。

2. 仪器　全自动酶标仪(MK23 ，芬兰) ；全自动洗板机(DEM2 Ⅱ，北京) 。

3. 方法　抗凝管制备：一次性试管中加入肝素10μl ，37°C 培养箱中烤干，备用；另取枸橼酸钠溶液220μl ，加入一次性试管中备用。随机选取我院凝血研究室作凝血功能检测的患者32例，分为未抗凝标本、枸橼酸钠抗凝标本及肝素抗凝标本，各加全血2 ml ，混匀，备用。所有标本均于采集后室温放置3 h ，1 500 r/ min 离心10 min ，分离血清(或血浆) ，按PIVKA 检测试剂盒说明书要求进行操作，酶标仪比色，记录实验结果。

二、结果

    3 种标本检测PIVKA2 Ⅱ，结果见表1 。经方差分析(α= 0. 05) ，三组结果间P 值均> 0. 05 ，表明标本3 种处理方法对实验结果并无显著影响。
    为比较三组结果间是否存在相关性,将其进行相关性分析(n = 32 ,双侧) ，结果各组PIVKA 结果之间呈直线正相关，且有很好的相关性( P < 0. 01) 。

表1 　3种标本检测PIVKA2 Ⅱ结果

    蛋白，在维生素K 和羧化酶作用下，转化为凝血酶原 。凝血酶原与PIVKA2 Ⅱ的区别在于前者具有能与钙离子结合而发挥凝血活性的γ2羧基谷氨酸残基，后者的谷氨酸残基未羧化不能结合钙离子，也不具有凝血功能。

    PIVKA2 Ⅱ的检测经历了放免法、发色底物法、EL ISA等方法，由于前两种方法均为间接法，需要复杂的吸附过程，操作繁杂，日益被EL ISA 法所取代。我们的实验所用试剂采用将PIVKA2 Ⅱ单克隆抗体(C4B6) 包被于聚苯乙烯酶标板上，待其与标本中PIVKA 反应后，加入第二抗体(羊抗兔IgG) 及显色剂，根据颜色深浅判断PIVKA2 Ⅱ含量。该方法是基于单克隆抗体建立的EL ISA 法，其特异性强、敏感度高。虽然枸橼酸钠可与血中Ca + + 结合而阻断凝血，肝素可增强AT2 Ⅲ活性,从而起到抗凝作用，但此两种处理方法均不改变PIVKA2 Ⅱ的抗原性，所以并不影响其与C4B6 的结合，这可能是标本3 种处理方法所得PIVKA结果差异无显著性，且相关性很好的原因。

摘自：《上海医学检验杂志》2003,18,6