什么是REA? 辐射能衰减(RADIATIVE ENERGY ATTENUATION),分析包含了一个颜色变化的反应。分析物的存在通过使色原(无反应染料) 物质转变为色基(有色染料)物质来测试。一个稳定的荧光物质(荧光原)也包含在反应混合物中。色基有对光吸收的特性,当色基存在时,所能测得的荧光原物质的荧光强度就会下降(辐射能衰减)。FPIA光路系统用来测定荧光变化的强度,辐射能强度变化的原理遵守Beer,Lambert和Bonguer定律(常称做Beer''s定律)。 REA对特殊分析物的定量分析是通过测定荧光物质的发光强度的对数与存在色基物质成反比关系。产生的色基物质与反应系统中的分析物的消耗成线性关系。所以通过测定荧光物质的衰减可以计算出样品中分析物的浓度。 什么是ICIA?
ICIA(ION CAPTURE IMMUNOASSAY),离子捕捉免疫分析法是雅培公司最近才发展起来的一项测试技术。 主要用于GHb、叶酸等这类项目的测定,具有极高地灵敏度,特异性和稳定性。 反应过程: 在这个技术中,在反应孔中的玻璃纤维预先包被了高分子的四铵合物。从而使纤维表面带正电,得以能够捕捉带负电的反应复合物。通过静电正负结合的原理,使反应复合物吸附在纤维上。此特有的离子网分离技术大大减少了干扰,提高了特异性和精密度。反应的复合物是通过抗原抗体相反应的原理,并联以荧光标记物,这个复合物通过连接带负电的多聚阴离子复合物,吸附到带正电的纤维表面,经过一系列彻底清洗等步骤后,测定荧光强度变化率,从而决定被测物质的浓度。
什么是FPIA? FPIA法(FLUORESCENCE POLARIZATION IMMUNASSAY),即荧光偏振免疫分析法。主要用于测定药物,激素等小分子物质。用其方法而生产的试剂具有极高地灵敏度,特异性和稳定性及反应快速。
反应过程: 根据竞争结合法的原理,利用被测物质中被测对象所有的偏振光性进行测量。分子量小的物质由于在溶液中进行活泼的旋转运动,虽然吸收了一定方向的激发偏振光,但是也不能继续产生另一偏振光,即失去偏振性。分子量大的物质,因为旋转运动受抑制,当它受到一定方向振动的光照后就能激发出另一波长的按一定方向振动的光来。荧光标志抗原由于分子量小,失去大部分偏振光性, 所以它的偏振光度就小,另一方面, 当抗原与抗体大分子的物质结合后, 分子量极大, 所以荧光偏振光度就变大。 标本中抗原与一定量的标志抗原与抗体进行竞争反应,样本中的抗原越多,与抗体结合的标志抗原就越少,从而激发的荧光偏振光度也就越少,当我们知道了已知浓度的抗原与荧光偏振光性的关系后就可以测量未知浓度的物质。 什么是MEIA? MEIA(MICROPARTICLE ENZYME IMMUNOASSAY), 微粒子酶免分析法是雅培公司的专利技术之一,主要用于测定蛋白质,病毒抗原等大分子物质。由雅培公司的 EIA 大珠子法发展而来,用其方法而生产的试剂具有极高地灵敏度,特异性和稳定性。 试剂特点: A.抗原/抗体包被的微粒子:微粒子的直径只有0.5um,表面多孔,从而大大增加了反应的表面积,提高了反应的灵敏度,缩短了反应的时间,微粒子是由多孔高分子粒子制成,具有很好地亲水性,且比重与水相仿,悬浮性极佳 。微粒子可与玻璃纤维不可逆结合,从而提高了反映的特异性。 B.酶标抗体:采用碱性磷酸酶作为标记物,碱性磷酸酶是最稳定的一种酶标记物。 C.基质液:采用极稳定的MUP(4-Methylumbelliferyl Phosphate), 4-甲基磷酸伞型酮。测定荧光发光的强度来检测被测物的浓度,极微的荧光就被特制的感光结构所感应到,具有更好地灵敏度和稳定性。并采用测初速度法代替终点法,每秒8次的读数大大提高了结果的准确性和缩短了反应的时间。反应过程一般在反应的第一阶段,标本与微粒子以一定比例混合,标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应。第一反应终了后,反应液的一部分被移到玻璃纤维上,洗去未反应的被检物质与其它的不要成份。 反应的第二阶段终了后,为了将未反应的第二抗体除去,再一次进行冲洗。反应的第三阶段,加入基质液(MUP),基质液(MUP)被碱性磷酸酶所分解生成Methylumbelliferone。当该生成物受荧光照射后就产生荧光。测定荧光强度的变化率,从而决定被测物质的浓度。 !-- content_end> |