南京军区福州总医院  全军医海陆空检验中心  林宝顺  郑德柱  刘文星

    血液分析仪已被广泛应用，但其对血小板计数准确的问题引起人们广泛观主，尤其是对大血小板的正确计数，目前大多数的血液分析仪由于其功能特点所限，未能将大血小板与小红细胞分开，无法准确计数血小板，ADVIA 120采用两个角度测定激光的散射强度的原理，能对大血小板比较准确计数。本文利用仪器调查了健康成人的大血小板的参考范围，并对ADVIA 120报警富含大血小板（>8.1%）的标本用免疫学法（CD61）、手工法、ADVIA 120和Coultet-JT检测，其结果的相关性作了比较；并对大血小板标本进行临床分析。

1   材料与方法

1.1  仪器ADVIA 120血液分析仪及配套试剂（拜耳公司）；Coultet-JT血液份析仪及配套试剂（贝克曼公司）；Coulter EPICSRXL流式细胞仪及配套试剂（贝克曼公司）；双目镜显微镜（Olympus公司）；血细胞计数板；等。

1.2  试剂  手工法试剂按《全国临床检验操作规程》有关章节严格配制。

1.3  标本  所有大血小板标本均为本院住院病人：418个成人标本为本院健康体验者，用EDTA-K2抗凝，1h内检测完毕。

1.4  方法
1.4.1  ADVIA 120经严格质控，仪器稳定的情况下，对418例健康成人的血标本进行检测，用Excel统计学软件统计大血小板的参考范围。
1.4.2  手工法按《全国临床检验操作规程》有关章节严格操作，每分标本由专人计数两次，最好取均值。
1.4.3  免疫学法参考Gill,ADVIA 120法及Coulter-JT法严格按照仪器操作说明进行检测
1.4.4  将41份富含大血小板标本用免疫学、手工法、ADVIA 120和Coulter-JT分别计数血小板，以免疫学结果为参考值（X轴），余三法结果（Y轴）与免疫学法比较。所有统计用Excel统计学软件进行处理。

2   结果

2.1  418份健康成人大血小板占血小板百分比的范围为<8.1%。

2.2  41份富含大血小板标本用三种方法与免疫学法计数结果的回归方和分别为Y1=0.8256x±12.173、Y2=0.8925x±3.1315和Y3=0.8125x-3.309；相关系数分别为0.8256、0.9306和0.7669。

2.3  290例大血小板标本临床分析结果见表1

3   讨论

3.1  世界卫生组织（WHO）推荐血小板计数的参考方法为用草酸铵溶液作为溶血-稀释剂，在相关显微镜下，肉眼计数血小板，但该方法存在如血小板在计数板上的分布误差，充池是否均匀等众多因素影响，Harrison称，这一方法在不同操作者之间，其变异系数可达10%～25%；很难准确计数血小板。Coulter-JT采用电阻抗原理计数血小板，其测定血小板体积临界值2.0～20.0fl，而对其临界值以外的血小板则根据正常人血小板体积符合正态分布的理论，通过0～70fl的电子拟合曲线，将这些异常大小的血小板估计计入。由于仪器此原理上的限制，仅能对体积呈正态分布的血小板进行“准确”计数，当样本中富含大型血小板时，将漏掉部分异常大的血小板，致使计数结果假性偏低。ADVIA 120采用两维激光的原理，能够测定大至60fl的血小板。Gill等推荐应用免疫学方法，在流式细胞仪（FCM）检测血小板特异性抗体（CD61）作为目前检测血小板的参考方法，但免疫学法要用昂贵的荧光标记单抗和高档的仪器，操作也较为繁锁；此外，有些人血小板表面不表达CD61，而表达CD62或CD42b，这种病人就不宜用免疫学方法检测血小板，因而免疫学法难以在常规工作中推广使用。从我们的结果可以看出，手工法和Coulter-JT法与参考方法的相关性较差。相关系数R2分别为0.8121和0.7669，而ADVIA 120与免疫学法相比有较好的相关性（R2为0.9306），而且操作非常简便，因此，我们认为ADVIA 120血液分析仪是当前检测血小板较理想仪器之一。

3.2  本文数据显示，分析临床29例大血小板标本中，以妊娠、肿瘤及心、脑、肾疾病多见，其妊娠和恶性肿瘤所占比例最高，分别为17.9%和20.0%。
    3.2.1  血小板是具有酶和生理活性的细胞，一般认为体积较大的血小板是较年青的血小板，其功能活性较强，随着血小板的老化，体积收缩，功能降低。体积较大的血小板含有较多致密颗粒，可释放更多的5-羟色胺等生物活性物质，其聚集和粘附功能较强，发生脑血栓等疾病的机会较大。
    3.2.2  大血小板还出现于其它疾病；急性心肌炎的病人，MPV升高，这可能与血栓素A2（TXA2）增多有关，同时，肾上腺素生成增多也起了重要的作用；心肺旁路术后止血功能发生障碍，随着血液的流换，MPV升高，这主要是因为将贮备的大血小板释放入循环血液中；体外循环术或血液病时，血小板数减少，MPV增加，是骨髓对急性要求的反应，此血小板称为“应激血小板”，是畸型的群体，不代表正常年青的血小板群；在冠心病中，MPV升高，且血小板凝集性增强，在背上腺素作用下变化更明显，这可能是因为小血小板更容易消耗及梗塞后血小板存活缩短所致；恶性肿瘤病人，由于化疗等治疗后，血小板数目减低，也产生“应激反应大血小板”；川合阳子等认为在慢性粒细胞白血病、血小板无力症、原发性血小板减少性紫癜等人也可能出现较多的大血小板，这可能与血小板破坏增多有关。

摘自《中国医学会全国第四届中青年检验医学学术会》