一、概况

    现如今，实体组织和骨髓的移植作为一种行之有效的治疗方案，已经广泛地应用于临床医学之中，并为很多看来已经“无药可医”的疾病拓展了一个很广阔的治疗空间。然而，器官来源的缺乏和诸如移植物排斥、移植物抗宿主病和原发病的复发等等复杂因素还严重地威胁着患者和移植物的存活期。为解决这一难题，科学家们一直在致力于解决以下两方面的问题：
    (1)最佳的供者与受者的组织配型。
    (2)改善移植后患者的维持治疗，其中包括新的免疫抑制剂的应用和对移植排斥状态的实时监控。而流式细胞术恰恰是在移植前后为同种异体移植的受者提供了一个较传统方法更为灵敏的监控方法，主要包括两个方面：
       1)检测受者血清中抗供者的anti-HLA  抗体。
       2)监测移植期间受者的免疫状态。

二、移植前

    在肾移植中，流式细胞术是一个非常有效的判断供者与受者之间配型是否恰当的工
具。因很难寻找到合适的配型，恰当的供体，且配型的正确与否直接关系到移植的成败。所以，用流式细胞术检测受者血清中抗供者的anti-HLA抗体也就成为移植前非常关键的实验。
检测移植抗体：
    根据抗体的种型、效价、靶抗原和器官移植的类型不同，抗体介导的排斥反应，可以是急进型也可以是延迟型（见Table  1）。

TABLE  1.Types  of  Immunological  Rejection

     Types             Reason
hyperacute    high-titer  antibody
accelerated    low-titer  antibody  and  /or  cell-mediated  response
acute         cellular  response
chronic       cellular  and  humoral  response

    流式细胞术应用之前，实验室检测抗供者抗体是通过补体依赖性细胞毒交叉配型实验（complement-dependent  cytotoxicity  crossmatch,  CDCXM）。即：供体淋巴细胞与选择的受体血清混合起来。同补体一同孵育，通过染色区别死亡细胞，而细胞死亡的程度可决定CDCXM是否阳性。尽管CDCXM阳性对于一些急进型排斥反应有一定价值，但CDCXM阴性却不能确认列抗体存在和保证移植物的长期存活。有文献报道，几例CDCXM阴性的患者，肾移植后发生了加速型排斥反应。
    而流式细胞术配型实验（Flow  Cytometric  crossmatch，FCXM）与CDCXM相比，却有了相当大的优越性（见Table2）。
TABLE  2.Advantages  of  the  Flow  Cytometric  Crossmatch
    (a) more  sensitive  than  the  CDCXM
    (b) takes  less  time  to  perform
    (c) independent  of  complement  activation
    (d) can  evaluate  cell  subsets
    (e) can  discriminate  IgG  and  IgM  antibodies
    (f) is  not  restricted  to  lymphocyte  targets
    (g) objective  analysis
    (h)correlates  with  improved  graft  survival

    在FCXM，供者细胞同受者血清混合，代替补体的是标记了荧光素的抗人免疫球蛋白（Figure  1）。如果抗供者抗体存在，它们就将同淋巴细胞结合，使得标记的荧光强度加强（Figure  2）。用流式细胞仪多参数分析就可以区别出哪一种淋巴细胞亚型是阳性（T细胞或B细胞），同时识别特异抗体的种型（IgG或IgM）。例如，我们用FITC-conjugated  anti-human-Immunoglobin,    PE-conjugated  CD20和Percp-conjugated  CD3三色抗体，就可以同时区分出T细胞和B细胞。若受者血清上对供者CD3细胞发生反应，则表明非-HLA抗体存在，因为已知HLA或排斥反应相关抗原不会只存在于T细胞。因而，这样的配型就不会成为移植禁忌症。相反，一个血清既同CD3反应，又同CD20反应，则预示至少有anti-HLAI型抗体存在。这样，FCM检测移植抗体因其同CDCXM相比更好的灵敏度而在临床有了越来越多的应用。

三、移植后
       
   免疫表型检测：
               
    尽管急进型和加速型抗体介导的排斥反应可以被移植前抗体检测所避免，但患者仍然面临着细胞介导的移植物排斥反应。突然的移植物功能丧失往往表明T细胞介导的急性排斥反应的发生。如果能够早期诊断，急性排斥反应往往能够成功地运用免疫抑制剂（诸如咪唑硫嘌呤、类固醇制剂等）而得到控制。因此，移植后患者免疫球蛋白的监控，就成为在移植物出现明显的损伤之前早期预测排斥反应的一个很重要的方法。几年来，科学家们监测CD4（即辅助性/诱导性）和CD8（细胞毒性/抑制性）T细胞亚群来监控肾移植受体的免疫状况。早期研究表明，CD4/CD8比值同移植排斥反应有关。进而研究发现，排斥反应往往发生于CD4/CD8比值低下的患者中。然而，也有一些学者认为，CD4/CD8比值与排斥反应没有直接关系，不同的研究结果争执不下源于CD4和CD8亚群的种型多样性（heterogeneity）。例如：CD8可分为抑制型和细胞毒型，还有部分NK细胞亦表达CD8抗原。同样，CD4也可根据CD29和CD45  RA  的表达分为成熟型和处女型，既使是区分了各种亚型，CD4、CD8同移植排斥反应的关系仍不明显，还有待于进一步研究。
    与细胞排斥反应相反，研究已经证实移植后抗体的产生预后较差，对于移植后患者的估价应综合进行，结合肌酐、尿素氮等其它临床指标，反复应用FCXM测定受者血清中抗原始供体细胞的抗体的产生。

四、结论
   
   很显然，流式细胞术在肾移植前、后都发挥着很重要的作用（见Table3）。相信流式细胞术更加深入的研究和应用，必将促进移植医学更加突飞猛进的发展。                 
                                     

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