凌  励      惠晓阳    沈  茜    周道银    秦琴

     Sysmex  XE-2100血液分析仪是日本希森美康公司最新推出的全自动血细胞分析仪，该仪器具有一个独立的幼稚粒细胞通道（IMI  CHANEL）,它利用不同阶段的幼稚粒细胞的体积、核的大小、核与胞浆密度的不同，使各阶段幼稚粒细胞在IMI散点图上占据不同的位置，越幼稚粒细胞越接近X轴，最接近X轴的细胞团为造血干细胞（HPC）[1]。近日我们对该功能进行精密度及与流式细胞仪间的相关性评估，现报告如下。

      1．材料与方法

      1.1仪器与试剂   

      1.11血细胞分析仪    日本希森美康公司Sysmex  XE-2100全自动血细胞分析仪；试剂包括：稀释液（CELLPACK），鞘流液（CELLSHEATH），白细胞溶血素（STROMATOLYSER-4DL），嗜碱性细胞溶血素（STROMATOLYSER-FB），白细胞4分类液（STROMATOLYSER-4DS），幼稚细胞溶血素（STROMATOLYSER-IM），血红蛋白溶血素（SULFOLYSER），均为日本希森美康公司产品。

      1.12流式细胞仪    美国BD公司FACSCalibur流式细胞仪（FCM）；ProCOUNT试剂：包括测定管（核酸染料CD34PE/CD45PerCP）和对照管（核酸染料MigG1PE/CD45PerCP三色试剂）和含有冻干的已知数量标准荧光微球的绝对计数管（TruCOUNT）,均为美国BD公司产品。

      1.2病例资料  10例我院血液科准备外周血自体干细胞移植的病人，其中慢性粒细胞白血病（CML）6例，非霍奇金淋巴瘤（NHL）3例，急性淋巴细胞白血病（ALL）1例；男性6例，女性4例；年龄在17至53岁之间。

      1.3样本采集    分别采集上述对象在注射粒系集落细胞刺激因子（G-CSF）后第1d、3d、5d、7d天的静脉血1.0ml置于含EDTA-K2  1.5-2.0mg的抗凝管内混匀，待检。

      1.4精密度试验    选择一例准备自体外周血干细胞移植的CML病人，在其注射G-CSF后其HPC达0.268×109/L的外周血样本，用XE-2100血细胞分析仪以手动进样方式连续检测10次进行重复性试验。

      1.5相关性试验      在采集后2小时内将血样轻轻混匀用XE-2100血细胞分析仪检测。剩余的血样在24小时内用流式细胞仪检测，检测时取两支TruCOUNT管，分别标记为测定管和对照管，并加入相应的20μl  ProCOUNT  三色试剂和50μl抗凝血，充分混匀，室温暗处反应30min后，加入红细胞溶解剂450μl，充分混匀，室温暗处反应30min后上机。对两台仪器检测的结果作直线回归分析。

    2．结果

    2．1精密度    选择一例样本重复检测10次，其HPC均值（X）为0.276×109/L，SD为0.025，CV为9.06%，其散点图见图1，从结果可以看出，该仪器检测HPC具有较好的重复性。

    2.2相关性

      Sysmex  XE-2100与FCM分别检测40份经G-CSF动员后样本的外周血干细胞的相关性见图2。结果显示r2为0.945，a为1.006，b为4.463，两种仪器检测HPC结果具有较好的相关性。

      3．讨论    近年来，利用造血生长因子动员的外周血造血干细胞移植（PBSCT）正越来越多地应用于多种恶性疾病的大剂量化疗后的支持治疗[2]。为评估骨髓动员效果，选择最佳采集时机，用FCM进行CD34+造血干细胞绝对计数已成为造血干细胞移植的常规检查之一[3]。我们在本次实验中，FCM使用ProCOUNT方法分析，采用核酸染料，CD34PE和CD45PerCP三种试剂染色分析，精确确认了造血干细胞，充分排除了非特异染色的干扰；使用内参标准(TRUCOUNT)决定细胞绝对值数量，避免了不同血球计数仪带来的误差；采用反向加样法减少了常规加样时的粘滞倾向，使加样更为精确；使用核酸染料设定阈值，清楚地分辨CD34+细胞和仪器噪音、细胞碎片，不受散射光、抗体荧光等参数的影响，而且标本处理为溶血免洗法，从而不会导致细胞丢失，从而使检测结果更加准确。

      Sysmex  XE-2100血细胞分析仪则利用成熟粒细胞膜表面含较高量的脂质及较低量的蛋白质而幼稚粒细胞膜表面则相反的原理[4]，设置了用于检测幼稚粒细胞的IMI通道，检测时在IMI通道中加入含聚乙二醇次乙基团和含硫氨基酸的表面活性剂以破坏细胞膜，导致成熟粒细胞膜破坏而幼稚粒细胞膜部分受损，从而使聚乙二醇次乙基团和硫化氨基酸进入细胞与细胞膜和细胞内容物结合。不同的幼稚粒细胞对试剂的作用有所不同，利用直流电法测量细胞的大小，而射频则透入细胞内，测量细胞核的大小及核与胞浆的密度，因而在以射频信号为纵轴，直流电信号为横轴的“IMI”散射图上，不同的细胞占据的位置不同,  越幼稚粒细胞其核密度越低，因而越接近横轴。Takahisa等的研究证实最接近于横轴的细胞团中以CD34阳性细胞为主[1，5]，故该仪器将这一细胞团中的细胞数设置为参数HPC。

      从我们的研究结果可以看出，XE-2100血细胞分析仪检测HPC具有较好的重复性，且与FCM检测骨髓动员后HPC具有较好的相关性。相比而言，XE-2100具有检测标本不需特殊处理，操作简便快速，费用低廉等优点，因而我们认为，在评估骨髓动员效果，选择最佳采集时机时，选择XE-2100血细胞分析仪HPC检测功能是一种比较简便有效的方法。

摘自：《中华检验杂志》2003年11期