陈伶利  刘琳琳  曾力希  邓乐

    免疫磁珠是一项免疫学技术，一般由载体磁珠和免疫配基结合而成。迄今，我国尚没有批量生产成为商品的高质量免疫磁珠。金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）是致病性金黄色葡萄球菌细胞表面一种特有的蛋白质，它具有与人IgG的Fc片段特异性结合的能力，每个SPA分子可以同时结合2个IgG分子，因此，可用来建立一种致病性金黄色葡萄球菌快速分离检验的体系。

   本研究采用乳液聚合法，合成一系列不同粒径的Fe3O4磁核，再经苯乙烯-丙烯醛共聚物为高分子壳层合成了带醛基的高分子磁珠。利用扫描电镜对磁珠的粒径和表面进行表征，并用红外光谱仪和电导滴定法对磁珠表面醛基进行定性和定量测定。制得的磁珠为浅棕色颗粒，在乳液中呈悬浮状态存在，显微镜下观察分散状态良好。而且有很强的磁感应，在无磁场作用时能良好的分散于水中，在外加磁场作用下发生定向移动，能从介质中分离出来。所得磁珠经真空冷冻干燥后用扫描电子显微镜观察磁珠的形态和粒径。观察到磁珠外观成很规则的球形，表面光滑，粒径较为均一，介于0.6～1μm之间；从红外光谱图中可以看到1720.57/cm、2713.88/cm和2811.46/cm的峰，分别为醛基的C=0和C-H的特征吸收峰。经电导率仪测定醛基含量达到0.7547 mmol/g。
将人IgG结合到制备的磁珠上，得到一系列人IgG-磁珠。用制备的该免疫磁珠进行了样品中快速分离检验金黄色葡萄球菌。取适量该免疫磁珠加入金黄色葡萄球菌菌液中，磁场下分离磁珠，将分离前后菌液及磁珠涂平板。用大肠杆菌和白葡萄球菌等作对照，只有金黄色葡萄球菌组用该免疫磁珠分离后浓度有了明显的降低。磁珠所涂平板的菌落进行甘露发酵试验、血浆凝固酶试验和过氧化氢酶试验，实验结果均为阳性，说明该免疫磁珠分离的菌为金黄色葡萄球菌。

    液体培养后收集适量金黄色葡萄球菌菌体，超声波细胞粉碎仪处理后高速离心收集上清液；将该人IgG-磁珠加入上清液中，培养30 min，磁场下分离；加入4 mol/L的尿素进行解离，磁场下分离磁珠，所得溶液进行超滤除盐。样品经质谱分析，有一相对分子质量（Mr）为42×103左右的峰值与SPA蛋白的相对分子质量相吻合，说明该免疫磁珠分离的蛋白为SPA蛋白。本方法及技术可以在2h内分离出样品中的致病性金黄色葡萄球菌或者其细胞中的SPA，并结合生化指标对其完成快速检测。由于这种人IgG-磁珠具有很好的富集效应，即使样品中该菌的数量很少，也能通过它富集并快速分离，所以该分离检测方法具有较高的灵敏性，有望在临床微生物检验中发挥作用。

摘自：《中华微生物和免疫学》2004年第9期