丁威  严杰   毛亚飞

    目的 确定我国15群15株问号钩端螺旋体（简称钩体）参考标准株和2群2株双曲钩体国际标准株携带LipL41基因情况，构建该基因的原核表达系统，鉴定表达产物的免疫原性。方法 常规酚-氯仿法提取上述17株钩体基因组DNA，高保真PCR扩增全长LipL41基因片段，T-A克隆后测序分型。构建LipL41基因原核表达系统，SDS-PAGE检测重组目的蛋白（rLipL41）表达情况。分别用钩体属特异性TR/patoc I抗原、rLipL41兔抗血清的Western blot鉴定其免疫反应性和抗原性。分别用显微镜凝集试验（MAT）、钩体黏附J774A.1细胞模型检测兔抗rLipL41血清的交叉凝集效价和黏附阻断作用。结果 15株问号钩体均有LipL41基因，并可分为LipL41/1和LipL41/2两种基因型，2株双曲钩体则否。11个LipL41/1基因和4个LipL41/2基因克隆之间的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为88.61%～88.67%和93.24%～97.18%。所构建的原核表达系统rLipL41/1和rLipL41/2的表达量分别占钩体总蛋白的30%和40%。rLipL41/1和rLipl41/2均能与TR/patoc I抗血清发生结合反应，免疫家兔能产生抗体。rLipL41/1和rLipL41/2兔抗血清对上述15株问号钩体MAT效价为1∶8～1∶128、1∶16～1∶256稀释时均能有效地阻断钩体对细胞的黏附。结论 我国主要的15群问号钩体代表株均有LipL41/1或LipL41/2基因。所构建原核表达系统能高效表达rLipL41/1和rLipL41/2。rLipL41/1和rLipL41/2是具有良好抗原性和免疫反应性、广泛存在于不同血清群问号钩体表面的蛋白抗原。

摘自：《中华微生物和免疫学》2004年第11期