黄天谊  黎学铭  刘涛  郭传坤  黄雨婷 林睿

  目的 对单管-套式多重聚合酶链反应（PCR）鉴定间日疟原虫基因型方法的应用价值进行研究。方法 以间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因为模型，综合套式多重PCR、等位特异PCR和标签引物扩增等技术，使用Primer Premier 5.0软件和NCBI的BLAST网络改进与优化引物设计，并用矩阵试验法优化反应条件和程序，同时，用单管-套式多重PCR和套式PCR对71份间日疟患者血标本的间日疟原虫基因型鉴定结果作比较。结果 单管-套式多重PCR可同时扩增出3种不同长度的基因型/族特异片段，且基本消除了二聚体等噪音。用单管-套式多重PCR鉴定检测71份间日疟患者血标本，62份与套式PCR鉴定结果一致，并新发现6份不同基因型和PV-Ⅱ型的混合感染；还将2份套式PCR鉴定为热带族的血标本纠正为PV-Ⅱ型，1份阴性血样鉴定为温带族。结论 研究建立的单管-套式/多重PCR鉴定间日疟原虫基因型的方法，简化了试验步骤，节省了试剂耗材，消除了PCR噪音，提高了检出间日疟原虫混合感染和低度感染的敏感性；是一种具有发展潜力的检测单核苷酸多态性和基因型鉴定的方法。

摘自：《中华检验医学杂志》2004年第10期