赵存珠 孔繁荣

　　沙眼衣原体（CT）是性传播疾病的主要病原体之一，CT导致的盆腔炎性疾病和性传播呈逐年上升的趋势，CT感染可造成流产、不孕、围产期感染和胎儿宫内感染[1-2]。由于感染后无特异性临床表现，因此实验室检查十分重要。
　　目前实验室诊断方法基本上可分为两在类，即核酸检测法和非核酸检测法。
　　1  核酸检测法
　　1．1 DNA探针杂交法
　　根据CT染色体和质粒和DNA序列设计DNA探针，以核酸杂交法检测CT，其敏感性较高。采用非放射性核素标记技术后，使用已相当普遍，但尚未估计出与其他非培养法相比的优点。该探针检测各类发病人群的敏感性和特异性分别为70.0%~92.0%和97.0%~98.0%[3-6].
　　1.2 多聚酶链反应(PCR)
　　PCR是1985年建立的一种本外扩散特异DNA片段的技术.Dutilh等首先报道应用PCR检测细胞培养物中的CT,此后多种诊断CT感染的PCR方法相断建立.PCR具有高度敏感性和特异性,重复性好并易于自动化,可检测少量DNA(相当于1~3)个原体).据报道,在抗生素治疗后,培养法检测可立即呈阴性,而PCR在2周内仍可得出阳性结果.
　　引物是决定PCR特异性的主要因素.目前报道的引物序列多选自衣原体的MOMP基因,rRNA基因和内源质粒,rRNA基因较为保守,多用于构建衣原体属特异性引物.一般认为质粒PCR较MOMP PCR更敏感.Palmer等报告MOMP PCR检测初段尿的敏感性为82.0%,特异性为94.0%;Mahony等报道质粒PCR检测初段尿的敏感性和特异性均可达100.0%;其他研究表明市售质粒PCR试剂具有高度敏感性(95.0%和97.0%)和特异性(99.8%和99.7%).质粒可能比MOMP基因更易于被扩增.
　　1.3 连接酶反应(LCR)
　　LCR为1989年建立和另一种核酸扩增方法.1995年LCR在美国获准用于CT的检测.Abbott公司已率先向市场投放利用LCR诊断CT感染的LCX试剂盒.LCR和EIA检测初面尿的敏感性分别为96.3%和37.0%,EIA和培养法检测宫颈拭子的敏感性分别为55.6%和78.3%,而培养法为56.3%,EIA仅为18.8%,特异性均为100.0%,LCR只扩增含需寻找的精确序列的DNA,因而具有很高的特异性,但敏感性不如PCR.因此有人提出联合使用PCR和LCR的设想[8].
　　1.4 限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)
　　细菌染色体的DNA RFLP是测定细菌基因特征的重要方法.根据菌株间RFLP的差异,可以在基因水平对细菌进行分型.Gaydos等[9]用PCR扩增MOMP的高可变基因段,扩增物做RFLP分析可将CT分为15个血清型,与免疫印迹法的符合率为86.4%.PCR扩增结合RFLP.可鉴别CT型别,检测混合血清型感染,适用于对不同类型的CT做流行病学分型研究.
除上述几种核酸检测法外,Qβ复制酶放大分析也被尝试用于检测CT感染,该法可检测样品中不稳定的RNA,在监测急性感染和研究持续性不发作感染的机制方面可能有潜在的作用.
　　2 非核酸检测法
　　2.1 鸡胚分离培养法
　　1907年捷克学者Halberstaedter和von-Prowazek在爪哇沙眼患者的眼结膜刮片中首次发现CT;1956年我国著名微生物学家汤飞凡教授首先建立用鸡胚卵黄囊接种分离CT的方法,以后发展成细胞培养法.该方法是在病人标本中加入适量的青、链霉素以抑制杂菌,而分离出多株CT.但由于该法繁琐、分离效果较差,现已很少采用.
　　2．2 细胞培养法
　　是目前诊断CT感染最可靠的方法。自上世纪70年代应用以来，一直作为评价其他非培养法的“金标准”。选用经放线菌酮或环已亚胺处理过的McCoy或HeLa-229单层细胞培养，再用单克隆荧光抗体染色后镜检。CT培养法的敏感性为80.0%~90.0%.特异性为100.0%.细胞培养法虽然特异性好,可靠性强,但培养条件和技术要求高,很难作为临床常规检查方法,目前通常仅作为其他实验室方法可靠度的参照标准.但是DNA扩增法的出现,使得这一观点已有所改变.
　　2.3 直接涂片染色法
　　包括结膜刮片和宫颈拭子涂片,用姬姆萨法染色后查找包涵体,与细胞培养法比较该法敏感性较低,仅为70.0%~80.0%,特异性约为80.0%.该不简便易行,所需时间短,但要求观察者有丰富的经验.
　　2.4酶免疫法
　　用于检测临床标本中的CT抗原.其特点为快速,简便,适合大量标本的检测,所用的抗体为衣原体特异性脂多糖单克隆或多克隆抗体,特异性强.Clark等以该法跨地区检测1529例生殖道标本,并与培养法对照,其敏感性男性为91.0%,女性为88.0%;特异性为99.0%.该法具有简便,快速和特点,但其敏感性和阳性预测值可受标本中CT的含量和人群中现患病率的影响而出现假阳性.
　　2．6 微量免疫荧光法（MIF）
　　Wang等创建的MIF技术是检测衣原体特异性抗体较准确的方法，但实验的主观性较大，观察者需要丰富的实践经验。虽然该方法可用来检测IgG、IgM和IgA抗体，但一般认为不适用于诊断当前感染，且敏感性和特异性尚不足，但该方法可用以检测泪液或泌尿生殖道分泌物中的CT抗体[11]，作为流生病学检查，该法应属优选。
　　2．7斑点免疫结合法
　　是以微孔滤膜用为固相载体，吸附抗原后进行的抗原抗体的反应，在膜上出现着色斑点为阳性结果，其敏感性为100.0%,特异性为92.4%.与细胞培养法的符合率为96.7%[12].该法适用于大批量标本的检测.
　　随着社会的日益开放,衣原体反致疾病的范围已逐渐扩大的多个临床学科,一方面是衣原体已成为性传播疾病中最常见的一种病原体,另一方面它可形成严重的持续感染.具血核酸扩增技术的PCR和LCR等检测方法能满足特异性,敏感性均高且快速检测的需要,但这些实验要求具备高精的仪器设备和熟练的技术,而且试剂价格昂贵,不太适合大量人群的普查;简便,能用不得标本进行检查的方法,就应首选酶免疫法,例如EIA和ELISA,经不断改进这两者的敏感性已提高到85.0%~90.0%.细胞培养法一直被视为评价其他非培养法的“金标准”,但现在将逐渐被PCR或LCR法所取代.总之,检测CT感染的方法很多,各有所长,尚未有一方法既简便,对标本要求低,能在临床上普遍推广,又具有理想的敏感性和特异性,还有待同行做进一步的研究工作.

摘自:《中国医学文摘.检验与临床》2005年19卷第5期