彭黎明 邓瑞雪

　　血细胞自动分析仪的广泛应用显著地提高了血细胞及相关参数检测的精密度。早在1975年，美国病理家协会（CAP）的调查就显示血红蛋白（Hb），红细胞比容（HCT）以及红细胞（RBC）检测的变异系数（CV）小于2.5%.检测白细胞(WBC)CV为3%~6%[1];但CAP1984年的调查却显示少于15%的临床实验室进行血细胞分析仪的校准[2],这表明血细胞自动分析的准确度并未与精密度保持同步提高[1].血细胞自动分析准确度的提高有赖其校准的溯源体系的建立,保证校准品的定值溯源至参考方法,即可使检测结果准确,又可使不同检测原理的分析仪在不同时间、地点得出的检测结果具有可比性[3，4]。目前已建立血细胞自动分析仪主要检测参数校准的溯源链。
　　一、校准与溯源
　　1．校准、溯源与溯源链：校准是指在特定情况下测试和调整检测仪器系统的检测值与标准值之间关系的操作过程[5，6]。溯源性（traceability）指通过一条具有规定不确定度（uncertainty）的不间断的比较链。使检测结果或标准值与一公认的标准（通常是国际或国家标准）相联系的属性，这条不间断的比较链称为“溯源链”[4，7，8]。如果校准时所用校准品的定值（标准值）通过不间断的比较链，与公认的标准联系起来，那么此校准就是具有溯源性的校准，校准后仪器的检测结果具有准确性和可比性[3，4，6]。
　　校准品具有不同的等级，用不同等级参考检测方法的校准，校准后的参考检测方法又反过来对相应等级的校准品进行定值，这样相互构成一条以SI单位（定义）为顶端的连续的校准溯源链（图1）[4，5，7]。SI单位为国际计量大会（CGPM）采纳和推荐的一种国际单位制，不随时间和空音间变化而变化，因此它是溯源链的最高等级[7，9，10]。溯源至SI单位的级参考检测方法是具有最高计量学特性的参考检测方法，通常是国际标准，它被国际计量局（BIPM），国家计量学会（NMI），认可参考检测实验室（ARML）认可或贯彻实施；一级校准品由一级参考检测方法直接定值后继续用于下一级参考检测方法的校准，二级参考检测方法是通常是国家标准或国际常规参考检测方法，NMI或ARML用一级参考检测的校准；然后再用已校准的二级参考检测方法对二级校准品或国际常规校准品定值，接下去依次是厂家的选择检测方法，厂家的常规检测方法和用户的常规检测方法，它们分别对应厂家的工作校准品、厂家的产品校准品和常规样本的检测结果（图1）[4，6，7，10]。
 

　　溯源性及溯源链的概念虽已清楚，但是仍有很多挑战面向校准的溯源，如何清楚定义校准品的值及其在医学诊断方面的应用，体外诊断医学设备校准品和质控品定值的溯源性标准（ISO/CD17511）对校准品的细节有以下建议：（1）医学诊断方面的应用；（2）生物学性质的组成成分；（3）数量；（4）检测单位[4]。
　　2．溯源与不确定度：不确定度是与检测结果相关联的一个参数，表现了检测值的分散性[7，11]。早在25年前，Tietz就指出在不同时间、地点、用不同的检测方法所获得的两个结果可被溯源至常规的参考标准而被比较，然而仅溯源不足以保证可比性，溯源链中的每一步都可引起结果的不确定度，其随着溯源链自上而下逐渐增加（图1）。因此，应该考虑溯源链中的累积不确定度[11]。检测和样准实验室能力的基本要求（EN ISO/IEC 17025）以及医学实验室质量和能力的特殊要求（EN/ISO 15189）中也要求评估检测的确定度[12]。
　　不确定度包括偏差和不精密度，以偏差评估系统误差的大小，以标准差评估随机误差的大小，其代表不精密度，而以不确定度评估总误差的大小，其代表准确度[4]。因而，溯源中不确定度的要素，然后确定各要素的标准不确定度（标准差），通过“误差传递”公式被整合而得到检测结果的合成标准不确定度[Uc（y）]：Uc（y）=√612+622+…+62n（指方差）。当报告结果的有确定度时，合成标准不确定度乘以覆盖因子（K），产生一具“扩展不确定度”（U）：U=Uc（y）×K。一般使用K=2或3，取K=2可达到95%可信区间，K=3可达到99%的可信区间。如果需要更宽的可信区间则可选择更大的K值[6，11，13]。
 
　　二、血细胞自动分析主要检测参数的参考方法与溯源
　　溯源链自上而下，溯源性逐渐降低，不确定度逐渐增加（图1）。因此，溯源过程应尽量减少中间环节，从计量学的角度来讲，理想的情况是用一级参考检测方法直接检测常规样本，省去所有中间环节，这在临床检难中显然不现实[7]。目前，除了氰化高铁血红蛋白（HiCN）法能作为一级参考检测方法，可溯源与SI单位外，其他血液形成分的检测尚未建立一级参考检测方法[1，6]。目前，二级参考检测方法或国际常规检测方法常由国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐的参考方法作为校准溯源链的最高等级[6，10]。
　　ICSH推荐使用电阻法半自动单通道血液分析仪计数RBC、WBC，并在1994年进行修订，将其确定为参考方法。1966年ICSH推荐的HiCN迄今为止仍作为Hb测定的首选参考方法，该法精密度和准确度都很高。目前血小板（PLT）计数的参考方法是ICSH制定的PLT/RBC比值法，即以流式细胞术检测PLT/RBC比值，通过IDSH参考方法计数RBC，再以PLT/RBC比值乘以RBC数得PLT结果。1980年ICSH曾推荐在Wintrobe管离心法的基础上用放射性核素标记在人白蛋白对HCT的常规测定方法的残留血浆进行校正，并以此作为HCT测定的参考方法，该法是HCT测定最准确的方法，但因其实验室要求特殊，非普通实验室所能开展；目前，ICSH制定了新的HCT测定的参考方法，即通过测定全血Hb浓度与平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC），间接得到HCT（Hb/MCHC法）[14]。