刘敬忠 闰梅 王立荣 王战勇 周艳 肖白

　　【摘要】目的 建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术。方法运用SYBR-Green1和ABI 7000热循环仪分别进行3个实时荧光定量聚合酶链反应（SYBR-Q-PCR），同时进行融解曲线（D.C）和Tm值分析,根据特定Tm值对应的D.C峰值判定基因型,即以该峰值≥Cut off值定为PCR结果阳发性,将PCR产物重组到T-载体,筛选到含正确扩增片段的克隆,以梯度稀释重组质粒DNA为模板,进行SYBR-Q-PCR得出标准曲线,从而定量未知标本.结果 优化了3个SYBR-Q-PCR反应的引物及其浓度,热循环条件等.检测—SEA等位基因的PCR产物长800bp,Tm=82.5℃±1℃.重组质粒拷贝数在1至105范围内,其对数值与CT值均呈良好线性关系.该检测技术的灵敏度常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高出16倍以上,联合运用3个SYBR-Q-PCR反应可以为—SEA缺失携带者,缺失型HbH病,非缺失型Hb病、α-地贫2纯合子、Bart′s水肿胎儿综合征做出基因诊断，并可用于产前诊断。结论  该技术具有自动化程度高、不需荧光标记探针、成本低，易质控、防污染、高通量等优点，适于临床推广应用。

摘自：《中华检验医学杂志》2005年8月第28卷第8期