刘朝晖 王汉平 陈劲龙 杨银梅 叶惠芬 曾军

　　【摘要】目的 通过运用变性高效液相色谱（DHPLC）技术对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的肺炎克雷伯菌临床分离株TEM型质粒进行基因分型，试图建立一种方便快捷的用于ESBL分子诊断及其流行病学监测的新方法。方法 利用PCR技术从肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出FEM型质粒的编码序列，扩增产物运用DHPLC技术进行分析，分析提示，异常的样本通过测序确定其基因突变的类型，最后通过比对确定其基因型。结果 共分析了101例肺炎克雷伯菌临床分离株，全部样本均扩增同TEM型质粒的编码序列，经过DHPLC分析，52例（51.4%）样本表现为单一的洗脱峰,其形态与TEM-1标准菌株的峰型相一致,测序确定它们的碱基序列亦相一致,不存在变异,为TEM-1型;49例(48.6%)样本表现为异常的洗脱峰,它们均为双峰,形态一致,但异源双链峰的高度有差异,测序结果表明它们均存在四种相同的基因突变,在NCBI网站比对后确定以TEM-116;测定结果还提示,部分样本中TEM-1和TEM-116混合存在,其比例的不同表现为DHPLC时异源双链峰高度的差异,文献检索表明,本次确定的TEM-116为一新的基因亚型,为国内首次报道.结论 DHPLC具有简便快捷,高通量和自动化的特点,重复性好,不仅可对已知突变作为即时诊断,还可发现新的基因亚型,不失为一种较好的ESBL分子诊断方法及其流行病学监测手段.

摘自：《中华微生物学和免疫学杂志》2005年9月第25卷第9期