梁华 张晓燕 沈荣显 邵一鸣

　　摘要：目的 建立实时荧光PCR检测血清浆病毒载量的方法，对马传染性贫血病毒（equine infectious anemia virus，EIAV）强毒株攻毒马和疫苗免疫攻毒马血浆中病毒载量进行了跟踪检测，探讨病毒载量和临床疾病状态的相关性。方法 以EIAV强毒株LN40序列为标准，在gag保守区设计1对引物和Taman探针，用于实时定量PCR扩增，用含扩增目的基因的体外转录RNA作标准品，获得标准曲线，对扩增样品进行准确定量。强毒株LN40直接攻毒，或者疫苗株LDV免疫马6个月后用强毒株LN40进行攻毒，跟踪检测攻毒马及免疫攻毒马血浆中EIAV载量情况。结果  反应在101~109copies/ml之间具有良好的线性关系，反应的检出下限为10 copies/ml。强毒攻毒马出现发热并最终死亡，发热期间马血浆中EIAV载量与体温呈正相关，载量最高达107 copies/ml以下。结论 成功建立了实时定量PCR检测血浆EIAV载量的方法，并证实了用实时荧光定时PCR检测EIAV病毒载量的方法来监测动物感染状态具有可行性，为EIAV致病机制研究的弱毒疫苗免疫保护机制的研究提供良好的技术平台。

摘自：《中华微生物学和免疫学杂志》2005年12月第25卷第12期