赵锦荣

  设计一对PCR引物，其中一引物经生物素化修饰，PCR扩增含耐药决定区297bp长的rpoB基因片段，借用链亲合素包被磁珠纯化单链PCR产物；设计2个正向测序引物，运用焦磷酸测序技术对耐药决定区进行序列测定；通过对一系列10倍稀释的结核分枝杆菌H₃₇Rv标准株DNA进行分析，评价所建立方法检测的敏感度；通过对已知耐药表型的结核分枝杆菌临床分离株进行分析，评价所建立方法检测的特异性。结果：PCR扩增后，可在2h内得到耐药决定区序列，所建立方法的检测灵敏度为50fgDNA反应；在所分析的利福平敏感株中均未检测到耐药决定区突变，而在耐利福平菌株中均检测到耐药决定区突变。结论：所建立的方法具有自动化程度高和结果准确等特点，适用于对耐利福平结核分枝杆菌进行快速高通量检测。

                                               摘自《中华结核和呼吸杂志》