习东　 宁琴　卢强华　 姚凯伦　 刘祖黎　 罗小平

摘　要：目的制备Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(hepatitis B virus deoxynucleic acid,HBV DNA)基因探针,研究其在检测HBV DNA中的应用.方法分别用枸橼酸还原金氯酸法、化学共沉淀法制备Au、Fe3O4纳米颗粒,二法结合制备Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒.通过金-硫(Au-S)共价键,将烷氢硫醇修饰的寡核苷酸结合在Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒上,制备纳米颗粒HBV DNA基因探针.用荧光标记法检测纳米颗粒探针表面寡核苷酸的覆盖率和与其互补的寡核苷酸的杂交效率.在尼龙膜上,使用Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒基因探针通过斑点杂交法、Ag染色法检测HBV DNA.在纳米颗粒基因探针液相检测体系中加入HBV DNA,透射电镜下观察.结果制备的Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒粒径均匀,为(15±5)nm,水相分散良好,具有磁性.Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒基因探针表面寡核苷酸的最大覆盖率为(120±8)条,最大杂交效率为(14±2)%.斑点杂交法可检出低至1010copies/ml的合成靶DNA,可目视化检出乙肝患者血清中HBV DNA的PCR产物.在液相检测体系中加入HBV DNA,透射电镜观察到纳米颗粒组装成大的网状结构的聚集体.结论成功制备了Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒HBV DNA基因探针,它可直接用于HBV DNA的检测.

摘自《中华检验医学杂志》2006年第4期