杨利敏　 王景林　 扈庭茂　

摘　要：目的A型肉毒毒素重链C-端结合区(BoNT/A Hc-C)的PCR拼接合成、重组表达与免疫原性分析.方法经密码子优化软件对编码基因序列重新优化设计,以16条长片段寡核苷酸引物经重叠PCR合成BoNT/AHc-C基因片段,插入表达载体pET-His,再转化大肠杆菌BL21(DE3)plys S中进行诱导表达,以金属螯合亲和层析法纯化重组蛋白,并进行鉴定和抗原性分析.结果表达工程菌裂解液经SDS-PAGE分析,重组蛋白约占细胞总蛋白的65%,为包涵体形式,经亲和层析一步纯化和柱上复性获得纯度大于95%的可溶性重组蛋白,Western blot和ELISA均证明,该重组蛋白与抗天然BoNT/A马血清抗毒素有特异性结合反应,是BoNT/AHc-C抗原,且免疫小鼠可耐受10个LD50 BoNT/A的攻击.结论所获重组BoNT/AHc-C蛋白具有良好的免疫原性,为研制基因工程疫苗奠定了基础.

摘自《中华微生物学和免疫学杂志》2006年第1期