马颖　 毛旭虎　 邹全明　 易勇　 程建平　 曾明　 张卫军　

摘　要：目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7志贺样毒素B亚单位(Shiga liketoxin 2B,Stx2B),并对其初步纯化.方法设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增志贺样毒素B亚单位的编码基因stx2b,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b,经测序鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,以Tricine-PAGE和Western blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白.结果扩增的stx2b基因约210 bp;原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli BL21(DE3)中得到高效可溶性表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约7×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达90.1%.结论EHEC O157:H7志贺样毒素B亚单位的高效表达与初步纯化,有利于进一步的生物学性质研究.

摘自《中华微生物和免疫学杂志》2006年第2期