杨保安　 杨银辉　 李佳明　 吕富双　 刘洪　 常国辉　 刘伯华　 卢山　祝庆余　

摘　要：目的建立能分泌具有中和活性的抗SARS-CoV单克隆抗体(McAb)细胞株,制备有中和活性的抗SARS-CoV McAb,用于SARS-CoV感染的早期特异诊断和进行SARS-CoV结构蛋白的功能研究.方法用灭活纯化SARS-CoV(BJ01株)免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,建立能稳定分泌SARS病毒McAb的杂交瘤细胞系,然后用中和试验进一步筛选分泌具有中和活性的抗SARS-CoVMcAb细胞株.利用SARS-CoV的S和N蛋白的不同长度肽段通过ELISA鉴定McAb的特异结合区域,分析S和N蛋白不同区域诱导产生抗体的能力和特性.结果建立了12株能稳定分泌抗SARS-CoVMcAb的杂交瘤细胞株,间接免疫荧光法检测抗体效价在1:320～1:20 480之间,其中6株具有较好的中和SARS-CoV的能力.具有中和活性的McAb中,3株是针对S蛋白的,2株是针对N蛋白的,其中抗S蛋白的中和抗体活性比抗N蛋白的中和抗体活性高,另外1株可能是针对SARS-CoV的其他结构蛋白的.进一步对6株抗S蛋白的McAb的特异抗原结合表位分析,发现其中3株结合位点在S蛋白第12～311氨基酸之间,2株在第310～535氨基酸之间,后者中和效价高于前者,另1株是针对S2蛋白的,SARS病毒的受体结合区正位于第310～535氨基酸这一区段.具有中和活性的McAb通过间接免疫荧光、ELISA、酶标免疫组化法和胶体金方法对SARS病毒进行检测,都显示出高度的特异性和良好亲和力.结论成功制备了具中和活性的抗SARS-CoV单克隆抗体,并分别测定了McAb对S蛋白和N蛋白的特异抗原结合活性,初步确定了S蛋白的中和表位.为今后SARS病毒的特异诊断、结构蛋白的功能分析和重组疫苗的研制奠定了较好的基础.

                                摘自《中华微生物和免疫学杂志》2006年第3期