仇超　 彭虹　 黄相刚　 任莉　 潘翔　 邵一鸣　 徐建青　

摘　要：目的构建携带绿色荧光蛋白基因的HIV假病毒载体,并研究该载体包装的HIV假病毒的感染活性,为进一步进行HIV生物学研究与中和抗体实验室评价搭建安全的技术平台.方法将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因插入到骨架质粒pNL43 Luc R-E-的nef基因读码框,获得携带EGFP基因的质粒pNL43 EGFP R-E-;通过将pNL43 EGFP R-E-与编码HIV膜蛋白的质粒共转染293T细胞,收集上清,获得携带EGFP基因的HIV假病毒.该假病毒感染CD4+CCR5+的HOS细胞后可表达绿色荧光,这样通过流式细胞仪可测定表达绿色荧光的细胞数与细胞感染率.结果携带绿色荧光蛋白基因的HIV假病毒感染CD4+CCR5+的HOS细胞后,被感染的细胞可以表达绿色荧光蛋白,细胞的感染率与病毒加入量呈线性关系.结论获得了携带绿色荧光蛋白基因的HIV假病毒载体,并建立了具有单轮感染活性的HIV假病毒感染的检测方法.

摘自《中华微生物和免疫学杂志》2006年第5期