杨湘越　 兰小鹏　 廖剑　 钟智强　 朱忠勇　

摘　要：目的为建立抗Sm自身抗体检测方法,自行克隆、表达和鉴定细胞核抗原Sm B'.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从HL-60细胞株中克隆Sm B'全长基因,将PCR产物直接进行TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,产物行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(western blot)鉴定.结果PCR产物约为700 bp,与预期657 bp接近,测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致.pGEX-5T-Sm B'重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和western blot结果显示融合蛋白分子量为51 000,具有与抗Sm B'抗体的反应性.结论成功克隆表达核抗原Sm B',为建立抗Sm自身抗体检测方法奠定了基础.

                                           摘自《临床检验杂志》2006年第3期