毛振彪　 张冬雷　 黄介飞　 王唯一　 鞠少卿　

摘　要：目的建立实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)检测鸟苷酰环化酶C(GC-C)基因表达的方法.方法在GC-C基因高保守区设计了特异性的引物和探针,RT-PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中GC-C mRNA含量,并以GC-C mRNA和β2M mRNA含量的比值作为评价GC-C表达水平的指标.结果本法检测GC-C mRNA含量的线性范围为101pg/ml～109pg/ml,样本批内和批间CV值分别为6.87%～11.12%和8.86%～15.19%.30例健康献血员和11例大肠良性病变患者的外周血单个核细胞(PBMC)中均未检出GC-C mRNA表达,大肠癌患者PBMC的GC-C mRNA检出率为83.8%(31/37),表达水平为0.88±0.06.10例大肠癌组织和T84细胞株均检出GC-CmRNA,表达水平分别为每μg组织(0.86±0.07)和每个细胞0.0082.结论成功建立RFQ-PCR检测GC-C mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度、特异性和可重复性.

                                   摘自《临床检验杂志》2006年第3期