曹新国　 王礼文　

摘　要：目的建立检测人外周血单个核细胞(PBMC)中FOXP3mRNA的方法.方法跨内含子设计外引物,并根据扩增的片段,设计一对内引物和TaqMan探针,采用套式实时荧光定量PCR(nested-real-time-PCR)方法.首次PCR扩增用减少引物浓度及循环次数的方法以增加其模板的特异性,再行第二次PCR扩增作实时荧光定量检测,用FOXP3和β-actin标准品作标准曲线,以二者比值作为FOXP3mRNA表达水平指标.结果重复6次PCR,6次试验Ct的总平均值为14.66,平均变异系数为5.81%.Ct值和模板起始浓度对数值之间具有较好的线性关系(R2=0.999);检测最低浓度可达100拷贝.结论nested-real-time-PCR检测PBMC中FOXP3mRNA的方法简单且重复性好,高度敏感且特异,可作为评价免疫功能及某些疾病治疗效果观察的临床常用方法.

摘自《临床检验杂志》2006年第4期