Simultaneous Detection of 15 Human Cytokines in a Single Sample of Stimulated Peripheral Blood Mononuclear Cells

Wilco de Jager,Henk te Velthuis,Berent J.Prakken et al.Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology,2003:133-139

目的：细胞因子水平的变化影响着整个细胞的免疫系统，任何一种由于细胞因子水平变化的疾病通常都是由多个细胞因子引起的。传统的检测方法中，例如ELISA，较多的样本用量以及大量的试剂消耗限制了进行大规模的检测。本研究旨在利用基于Luminex荧光免疫微球技术Bio－plex系统对15种细胞因子并行检测，并和传统ELISA方法做比较。

方法：整个Bio－plex系统是在Luminex机器上进行，每种细胞因子的抗体共价交联在通过两种不同染料配比编码的微球上，加入血清样本孵育后，再加入生物素标记的二抗以及链亲和素标记的PE，整个检测结果是通过Luminex机器阅读微球上PE的荧光值而得出。并将来自不同公司的ELISA试剂盒对照检测。

结果：Bio－plex系统检测范围可以达4～5个数量级，最低检测极限2.4pg/ml，最高检测极限是10000pg/ml，ELISA的检测范围是3个数量级；浓度分别是100 pg/ml、1000 pg/ml的样本中，回收率分别是91％～108％以及98％～107％；批内差CV在7.1％～9.6％，批间差CV在10.3％～20％之间；与ELISA方法比较，各因子的检测相关系数0.75～0.99之间。

结论：多指标检测技术是定量检测各种细胞因子的强有力手段，尤其是对健康样本与慢性炎症病人之间的活性淋巴细胞因子的差异分析更完全。相比传统的检测方法，Bio－plex系统不但能同时检测不同样本，减少标本用量（少80％之多），而且能大大降低试验费用。