Analytical Validation of the Tag-It High-Throughput Microsphere-Based Universal Array Genotyping Platform: Application to the Multiplex Detection of a Panel of Thrombophilia- Associated Single-Nucleotide Polymorphisms

Susan Bortolin, Margot Black, Hemanshu Modi, Ihor Boszko, Daniel Kobler,

Dan Fieldhouse, Eve Lopes, Jean-Michel Lacroix, Rebecca Grimwood, Philip Wells, Richard Janeczko, and Roman Zastawny

目的：单核苷酸多态性（SNP）在疾病监测、新药研究以及个体化医疗中具有重大的产业价值，因此，许多高通量高自动化的检测技术应运而生，其中微阵列在上面就有过研究，但由于其技术平台的局限性，其在临床诊断研究中的接受程度非常有限。本研究在基于微球通用序列标签，Luninex液芯检测平台，开发出一种快速、高通量的多指标分析平台对静脉血栓形成的6个SNP位点检测。

方法：研究中所检测的6个SNP位点是Leiden（G1691A）、factor II G20210A、MTHFR C677T、MTHFR A1298C、factor XIII val34leu以及TFPI C536T。在此6个位点上，设计好相应的PCR扩增引物，PCR扩增后，产物经过碱性磷酸酶以及核酸外切酶的消化，然后利用各位点的ASPE（等位基因特异性引物延伸）引物再一次的扩增，此扩增引物5‘端标记了Tag序列以及dCTP经过生物素标记。同时，不同颜色的编码微球共价交联上anti－tag序列，当ASPE扩增完成后，产物与微球杂交孵育后，加入SA-PE，与dCTP上的生物素结合，再次孵育后上机读荧光值，结果分析。

结果：对此6个SNP位点的检测，Tag-It液芯分析与DNA测序结果的符合率为100%。构建的通用序列杂交体系适用于同一个种属基因组的任何SNP/突变分析体系。Tag-It液芯基因分型平台将有助于将及时地将新发现的风险因子纳入已知风险因子的研究体系，从而可以在更广泛的层面研究不同风险因子之间的相互影响及其对静脉血栓形成的作用。

结论：Tag-It液芯基因分型平台是静脉血栓形成相关多等位基因的快速、准确、经济的高通量分析工具；同时也适用于任何需要同时分析多个遗传标记的实验室检测。